人甲状旁腺激素基因表达载体的构建

发布时间：2021-08-29 06:35

　　甲状旁腺激素（PTH）是保持体内血钙及磷酸盐平衡的主要调节因子，甲状旁腺（PTG）损伤，肿瘤或遗传因素等都会导致PTH分泌不足或生物活性降低，造成低钙血症即甲状旁腺机能减退症（HPT）。目前，国内外所采取的各种治疗方法，效果都不甚理想。近年来，随着分子生物学及相关领域技术的迅速发展，相关基因克隆及表达的成功使得对该病的基因治疗成为可能。本研究的目的是扩增出PTH的完整编码序列，构建该基因的表达载体质粒。根据国外已报道的甲状旁腺激素（PTH）基因序列，应用OLIG04.0设计引物，并在引物中引入两个酶切位点（EcoRI、XbaI）。以从人胚甲状旁腺组织中提取的mRNA作为模板，经逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增出一条大小约270bp的cDNA片段，将该基因片段经EcoRI、XbaI两个限制性内切酶消化后，插入到pCR3.1载体上，经大肠杆菌JM109感受态转化后，筛选获得含插入片段的重组表达质粒（pCR3.1·PTH）。对阳性重组质粒进行鉴定及序列分析。结果表明阳性重组质粒经PCR扩增，可以获得与PTH基因大小相符的片段，约270bp；另外，经EcoRI、XbaI双酶切鉴定，也可... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：34 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 甲状旁腺激素（PTH）分子生物学研究进展
    1.2 甲状旁腺机能减退症
    1.3 PTH用于甲状旁腺机能减退症治疗的展望
2 材料与方法
    2.1 试验材料
    2.2 试验方法
3 结果
    3.1 目的基因的RT-PCR结果
    3.2 重组质粒的限制性酶切分析
    3.3 DNA的序列测定与分析
4 讨论
5 结论
6 参考文献
附图
致谢



本文编号：3370104