人单核细胞（THP-1）cDNA表达文库的构建及趋化因子CXCL14（MIP-2γ/BRAK）受体的寻找

发布时间：2021-09-02 02:07

　　趋化因子MIP-2y是本实验室于2000年从人树突状细胞cDNA文库中通过大规模随机测序而独立发现的一个属于CXC家族的新型趋化因子（BRAK为另一个研究小组给以的命名,CXCL14为国际专门命名委员会给以的统一名称,下文将一律使用CXCL14这一名称）。研究表明CXCL14对中性粒细胞具有强力的趋化作用,对树突状细胞具有较弱的趋化作用,而对单核细胞、NK细胞、T和B淋巴细胞不具有趋化作用。该趋化因子在大多数正常组织中呈组成型表达,而在大多数肿瘤细胞系中未能检测到。目前关于该趋化因子在体内的具体生理作用还不清楚,这主要是由于迄今为止该趋化因子的受体还未被克隆出来。 趋化因子受体属于七次跨膜的G蛋白耦联受体（GPCR）超家族,而GPCR是当前临床用药最主要的靶点。目前还有约150个所谓孤儿GPCR的天然配体及功能未知,国际上有多家实验室和许多生物及制药公司一直致力于破解（deorphanize）这些孤儿GPCR,包括寻找CXCL14受体,这一方面对于深入研究CXCL14的功能是必需的,同时也具有极大的临床开发前景,可至今还未克隆成功。本研究也是想通过不同的策略和技术路线来克隆CXC... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

SD-sPS(lE分析CXCL14一GST融合蛋白的表达及纯化

SDS一PSGE分析GST蛋白的表达及纯化

图7.G蛋白祸联受体的结构特征48R四er7.歇川eutar一ehaareteristicsorGpmtein·coup一“erceptosr.48GProtein一couPledreeePtosrhvaehePthaeliacldomains.AnlinotemriniaerextraecllularsPacenadachtoxytemriniarePersentnitheintraeellularconsevredocmmollmotisfineachTMofllwo:TMI，GNorGxUxxDxxxxxxx()P:TM111，Sxxx伙xhxDE/RY;TM，VYWxxxxxxxxFxxPoxxxxx;YTMVl，FxxCxxP;andTMVll，伙xxxxxxN心PoY.分析其可能的原因有如下几条。首先，在大肠杆菌中进行的原核表达融合蛋白有可能折叠不完全正确，因此与其受体结合时的亲和力太低甚至性。其二，靶细胞选择不恰当或靶细胞数量不够，有可能KG一1细胞CXCL14受体，之所以选择该细胞是根据以前的生长实验结果;另外我们量为3xl护，而文献报道有多至109细胞的。其三，还有可能是检测方法无法检测出微量的受体蛋白，甚至用银染也未见预期的蛋白条带，因此文性氨基酸进行代谢标记然后用放射性自显影来检测。此外结合缓冲液的组。


本文编号：3378096