脐血造血干细胞移植NOD/SCID小鼠后人免疫功能重建的研究

发布时间：2021-09-17 05:45

　　目的 探讨脐血来源造血干细胞植入NOD／SCID小鼠所需条件，建立hu-SRC-NOD／SCID模型并检测植入后嵌和体内重建造血和免疫的水平，以期为今后应用该模型发展疫苗、药物等相关研究奠定基础。 方法 分离分选脐血MNC、CD34⁺细胞，通过尾静脉分别移植各组经照射(⁶⁰Co，300cGy)或未照射的NOD／SCID小鼠。移植4～10周后流式细胞术分别检测小鼠外周血、骨髓、胸腺人CD45、CD19、CD3抗原的表达；移植6周后提取部分小鼠骨髓、胸腺RNA，RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因，并用基因扫描进行T细胞克隆性分析；10周后RT-PCR检测外周血、骨髓人MHC-β₂ m及Rag2基因表达：NOD／SCID小鼠PBMNC及胸腺、骨髓、脾细胞反复冻融处理去除免疫反应性和增殖能力后与脐血MNC共培养2～3周经RT-PCR和基因扫描分析脐血T细胞克隆性。 结果 经免疫磁珠分选可获得足量CD34⁺细胞，纯度80～95％；NOD／SCID小鼠照射后移植脐血CD34<... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫磁珠分选前后CD34+细胞纯度变化

CD3抗原表达，A组仅有1只植入，且只表达CD45、CD19。表达分布见表2。移植后，各组植入小鼠外周血细胞CD45+表达水平于6一8达到高峰，各时点CD45+、CD45+CD19+、CD45+CD3+细胞表达水平见表3一5，及图3~5。表3:移植后鼠外周血表达人源CD45+细胞水平(%)各组CD45+细胞表达水平(%)时l司(周 )ABCDEF43.57.6士0.67.1士0.66.0士0.4一一63.97.9士0.68.1士0.66.1士0.5一一83.49.1士 0.85.3士0.3一一 102.17.7士 1.03.1士0.3一一口未照射移植CD34+细胞组(A).移植CD34+细胞组(B+C).移植姗吸:组(D)︵%︶如以理异的哪干Ke 4weeks6weeks8.eeks10weeks图3:移植后鼠外周血表达人源CD45+细胞水平

R检测人MHC一BZm基因及ra歇基因HC-I类分子由重链(a链)和BZm(编码基因在15号染细胞表面。提取B组小鼠外周血、骨髓RNA，经Rl’-Pm(144bp)，表明小鼠获得植入。为进一步证明小鼠获得取人ra歇基因为检测标志。重组激活蛋白RAGZ同RA异性因子，为淋巴细胞发育和V(D)J重组所必需，编色体上。在B组小鼠骨髓中，检测到人RagZ基因片断

【参考文献】：
期刊论文
[1]应用TCR Vβ基因谱分析血液病与免疫性疾病的T细胞克隆性[J]. 李扬秋.  中国实验血液学杂志. 1999(03)
[2]利用基因扫描分析TCR Vβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克隆性[J]. 李扬秋,汪明春,吴幼华.  中国免疫学杂志. 1998(01)



本文编号：3398088