基于DENV-prM/E基因构建DENV-VLP及其免疫学特性

发布时间：2021-09-22 00:09

　　【目的】构建和表达登革病毒4型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性。【方法】用RT-PCR法扩增DENV4-prM/E基因,构建重组质粒pGAPZ-sprM/E-D4,转化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鉴定目的蛋白表达。切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化。免疫三组Balb/C小鼠,每组15只。采用间接ELISA检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测脾分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的细胞。【结果】重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径20³0 nm的球形颗粒,VLP免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ELISPOT结果提示DENV4-VLP与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌IFN-γ,TNF-α的细胞数目明显增加,各组分泌IL-10细胞数目的整体水平均不高。【结论】应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了DENV4-VLP,具有良好的免疫原性,可诱导Balb/C小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Th1型免... 

【文章来源】：中山大学学报(医学科学版). 2014,35(04)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒和细胞
    1.2 载体和宿主菌
    1.3 生物信息学软件和资源
    1.4 主要试剂
    1.5 实验方法
    1.6 实验动物
    1.7 动物免疫
2 结果
    2.1 p GAPZ-spr M-D4的构建及表达
    2.2 DENV4 VLP浓缩纯化及滴度确定
    2.3 免疫血清抗原特异性抗体变化趋势
    2.4 免疫小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞变化
    2.5 ELISPOT评价DENV4-VLP免疫小鼠的细胞免疫应答
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]登革病毒3型病毒样颗粒在酵母体内的表达与鉴定[J]. 付春云,方丹云,刘岩,喻治准,江汉宁,江丽芳,周俊梅.  热带医学杂志. 2011(06)

博士论文
[1]多价登革热病毒样颗粒疫苗的研究[D]. 张硕.中国疾病预防控制中心 2011



本文编号：3402762