人β地中海贫血β～（41/42）突变基因的克隆和真核表达体系的构建

发布时间：2021-09-22 05:32

　　背景:β地中海贫血（简称β地贫）是一种具有高度异质性的遗传疾病。由于β珠蛋白基因突变,造成α珠蛋白肽链和β珠蛋白肽链间的合成失平衡是其主要发病机制。在东南亚,包括我国西南、华南地区,β地贫已成为严重的公共卫生问题,其中β^41/42突变是最常见的导致重型β地贫的突变之一。 目的:克隆人地中海贫血基因β^41/42及调控系列LCR,构建该致病基因的体外真核表达体系,为该病基因治疗的研究提供理想模型。 方法:抽提β^41/42纯合子患者的DNA,PCR扩增出人β珠蛋白基因座控制区（LCR）和β^41/42基因,将其串连克隆至真核稳定表达质粒pcDNA3.1（-）中,脂质体转染至小鼠红白血病细胞（MEL）,DMSO诱导MEL细胞表达,逆转录PCR检测人β^41/42基因在MEL中的表达。 结果:成功构建了包括长为2.1kb的人β^41/42突变基因和长5.5kb的人β珠蛋白基因的远端调控序列（LCR）的真核表达质粒pcDNA3.1-LCR-β^41... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人地中海贫血p‘/42l突变基因和LCR基因CPR扩增图

而后者没有。poDNA3.1一LCR，poDNA3.1G)经LCR特异性引物PCR扩增，前者得到5.skb的带，而后者没有，说明LCR插入方向大小正确(见图6)。

I、Ec0RI依次酶切分别产生2种和3种长度片段，分别为llKb、2.IKb和6Kb、5.SKb及1.6Kb，peoNA3.l一LCR一p‘，“，，peoNA3.1。)经p‘，“，特异性引物PCR扩增，前者得到2.Ikb的带，而后者没有(见图7、图8)，说明LCR和p‘/42l基因插入方向大小正确。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3403229