流式细胞术检测NK细胞的细胞毒作用的两种方法比较

发布时间：2021-09-22 11:43

　　目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死亡率。结果:各实验组中CFSE/7-AAD法检出的靶细胞死亡率均高于Calcein-AM释放法,在低效靶比、弱细胞毒作用条件下,差异具有统计学意义。细胞毒作用较弱时,Calcein-AM释放法平均荧强度变化不显著、结果误差较大;而CFSE/7-AAD法则能更加敏感地检出靶细胞的死亡率。结论:CFSE/7-AAD法能够特异、灵敏地检出NK细胞的细胞毒活性,所获得的结果更为可靠。 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019,35(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

靶细胞经Calcein-AM或CFSE标记前后FL-1通道上荧光强度变化及NK细胞自发荧光Fig．1Fluorescenceintensityoftargetcellspriortoand

图2Calcein-AM法释放法检测NK细胞对K562细胞和白血病原始细胞的细胞毒作用Fig．2CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCalcein-AMreleaseNote:A.MFIofK562cellsautofluorescence;B.MFIofK562cellsafterCalcein-AMlabeling;C.NK-K562cellsafterco-culture;D.MFIofK562cellsafterco-culture;E.MFIofleukemiablastautofluorescence;F.MFIofleukemiablastafterCalcein-AMlabeling;G.NK-leukemiablastafterco-culture;H.MFIofleukemiablastafterco-culture.图3CFSE/7-AAD法检测NK细胞对K562细胞和白血病原始细胞的细胞毒作用Fig．3CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCFSE/7-AADNote:A.NK-K562cellsafterco-culture;B.K562cellsweregatedinP2(CFSE+cells);C.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinK562targetcells(Q11-UＲ);D.NK-leukemiablastafterco-culture;E.leukemiablastweregatedinP2(CFSE+cells);F.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinleukemiablast(Q2-UＲ).3讨论本文中，随机健康献血者外周血PBMC中NK细胞含量仅有(11.76±3.55)%。其他针对不同地区中国人群外周血NK细胞含量的研究表明，随机人群外周血PBMC中NK细胞含量仅有(7.35～·823·中国免疫学杂志2019年第35卷

图2Calcein-AM法释放法检测NK细胞对K562细胞和白血病原始细胞的细胞毒作用Fig．2CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCalcein-AMreleaseNote:A.MFIofK562cellsautofluorescence;B.MFIofK562cellsafterCalcein-AMlabeling;C.NK-K562cellsafterco-culture;D.MFIofK562cellsafterco-culture;E.MFIofleukemiablastautofluorescence;F.MFIofleukemiablastafterCalcein-AMlabeling;G.NK-leukemiablastafterco-culture;H.MFIofleukemiablastafterco-culture.图3CFSE/7-AAD法检测NK细胞对K562细胞和白血病原始细胞的细胞毒作用Fig．3CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCFSE/7-AADNote:A.NK-K562cellsafterco-culture;B.K562cellsweregatedinP2(CFSE+cells);C.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinK562targetcells(Q11-UＲ);D.NK-leukemiablastafterco-culture;E.leukemiablastweregatedinP2(CFSE+cells);F.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinleukemiablast(Q2-UＲ).3讨论本文中，随机健康献血者外周血PBMC中NK细胞含量仅有(11.76±3.55)%。其他针对不同地区中国人群外周血NK细胞含量的研究表明，随机人群外周血PBMC中NK细胞含量仅有(7.35～·823·中国免疫学杂志2019年第35卷

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3403704