干扰素在肝癌细胞Huh7.0中诱导SAMHD1抑制HBV复制

发布时间：2021-09-23 10:04

　　目的:研究干扰素调节宿主限制性因子SAMHD1的表达而抑制HBV复制的分子机制。方法:首先不同剂量的干扰素α、β和γ处理Huh7. 0细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测SAMHD1在转录和翻译后的表达水平;进一步通过siRNA干扰内源性的SAMHD1,再评价干扰素α、β对病毒的抑制效应;最后通过免疫荧光检测了干扰素α诱导内源性SAMHD1的细胞定位及Southern blot检测了SAMHD1细胞定位对病毒复制的影响。结果:在Huh7. 0细胞中,SAMHD1的RNA水平和蛋白表达明显受干扰素α和β的诱导升高;干扰SAMHD1后干扰素α和β对HBV复制的抑制作用消失; SAMHD1定位在细胞核内,干扰素α诱导SAMHD1同样定位在细胞核内,缺失核定位信号后SAMHD1丧失了其抑制病毒复制的作用。结论:在Huh7细胞中,干扰素α、β能诱导SAMHD1表达上调来抑制HBV的复制,SAMDH1的抗病毒作用依赖于其细胞定位。 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2019,39(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 质粒构建和细胞培养
        1.2.2 免疫荧光检测SAMHD1在细胞中的定位
        1.2.3 荧光定量PCR检测干扰素处理后SAMHD1的表达
        1.2.4 Western blot检测不同处理后的SAMHD1的表达
        1.2.5 病毒核心颗粒DNA的提取
        1.2.6 Southern Blot检测HBV的复制水平
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 干扰素处理后SAMHD1的表达
    2.2 沉默SAMHD1后拮抗干扰素α、β对HBV的抑制作用
    2.3 SAMHD1抑制HBV依赖于其细胞定位
3 讨论



本文编号：3405512