人呼吸道合胞病毒G蛋白多肽重组腺病毒的构建、表达与鉴定

发布时间：2021-09-29 18:03

　　人呼吸道合胞病毒G蛋白多肽重组腺病毒的构建、表达与鉴定 目的 人工合成的人呼吸道合胞病毒（hRSV）G蛋白多肽,含有两个二硫键和多个保护性B细胞表位,免疫动物后,能产生高水平的保护性抗体,可作为一种新型RSV疫苗抗原。本文采用非复制型脓病毒载体,利用同源重组方法,获得表达G蛋白多肽的非复制型重组腺病毒。 方法 本文根据G蛋白多肽碱基序列的需要,设计并合成了带有突变核苷酸序列的寡聚核苷酸引物,以G基因RT-PCR产物为模板,采用高保真DNA聚合酶,PCR突变扩增,得到G蛋白多肽编码序列。利用普通Taq DNA聚合酶PCR产物3′末端加“A”特性,将G蛋白多肽编码序列3′平末端加“A”,并与T载体连接。并将外源性基因亚克隆于穿梭载体pShuttle—CMV。PmeⅠ线性化重组穿梭载体,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在E.coli BJ5183细胞内同源重组得到重组腺病毒DNA质粒。以Pac Ⅰ酶切获得的重组腺病毒DNA分子,脂质体法转染293细胞,产生基因组结构均一的重组腺病毒。PCR方法检测G蛋白多肽在重组腺病毒中的稳定整合。 结果 利用带有突变核苷酸序列的寡核苷酸... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

一I正常H月p一2细胞Figs一1Nomra1HEP一2eell图5一2Fjgs一2.22R不PCR获得RSVC蛋白编码基因病变的H即一2细胞CPEofHEP一2eell

RI飞PCR扩增G蛋白编码基因Fig6GgenewasmaPlifiedbyRT，PCRDL200ODNAMakrer(2000，1000，750，500，250，‘100bP)

7PCR突变法扩增mGPmGPgenewasamPlifiedbyPCRker(2000，1000，750，500，25mGppCR产物(207bp)erase高保真酶扩增获得的m。连接产物经Notl单酶双鉴定，同时送公司测序。(图


本文编号：3414195