弓形虫SAG1-ROP2复合基因疫苗与免疫佐剂pCTA2/B及pmIL-12对小鼠的免疫保护性研究

发布时间：2021-10-08 00:41

　　弓形虫全球分布，能引起人兽共患的弓形虫病。该病的人群感染极为普遍，人群感染率约为25％-50％。孕妇孕期首次感染弓形虫后可导致早产、流产、胎儿发育畸形。弓形虫病也是最常见的机会性寄生虫病，肿瘤患者体内抗弓形虫抗体阳性率高达63％；HIV／AIDS人群抗弓形虫抗体阳性率分别为44.8％和95.0％，该病已成为免疫功能严重低下患者的主要死亡原因。此外，由弓形虫引起的禽畜类疾病也给畜牧业造成了严重的经济损失。迄今尚无治疗弓形虫病的特效药物，因此研制安全有效的疫苗极为迫切。弓形虫生活史较复杂，抗原成分具有发育阶段的特异性或差异性。因此成功的弓形虫疫苗应针对多个特异性抗原，所产生的保护性免疫力需针对生活史中一个以上的感染阶段。SAG1为弓形虫速殖子期特异的主要表面抗原之一，具有高度的免疫原性和免疫保护性，是弓形虫疫苗开发的主要抗原。ROP2（Rhoptry2）蛋白是弓形虫棒状体分泌的一种蛋白，主要协助虫体入侵宿主细胞，在弓形虫生活史的速殖子期、缓殖子期和子孢子期中均有表达，具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和ROP2在虫体入侵宿主的过程中相互促进，其相应的抗体可有效拮抗弓形虫感染。同时，为攻克... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ROPZ基因TA一C10ning的构建及鉴定决.纯化的R()PZ尸CR产物;2.ROPZ一TACloning质粒的双酶切鉴定;3.DNAMarkor

条带:一条位于约5400bp位置，与peDNA3.l空质粒经相同酶切后的电泳结果相同:另一条位于约1000bp位置，此片段长度与ROPZ片段长度(1042bp)相当(见图2)。3· 2peDNA3.l一ROPZ的PCR鉴定PcDNA3.1一ROPZ质粒经PCR扩增，电泳结果示:在位于约IO00bP位置有一明显的条带，此片段长度与ROPZ片段长度 (1042bP)相当，也与pcDNA3.1一ROPZ质粒双酶切鉴定的结果一致(见图2)。以上两结果均表明:目的基因ROPZ已正确插入到质粒PcDNA3.1的EcoRI、Handlll两酶切位点之间。4.测序结果测序公司测序分2个循环:利用质粒peDNA3.1的通用引物M13R介48)来进行正向测序，(见测序结果图1);利用质粒pcDNA3.1的通用引物M13F(一47)来进行反向测序(见测序结果图2)。结果示:测序核昔酸序列与文献报道的ROPZ基因序列一致，表明我们成功克隆出含ROPZ的基因序列。

B的PCR鉴定B质粒经PCR扩增，电泳结果示度与CTAZ/B片段长度(516bp)相果一致(见图5)。明:目的基因CTAZ/B己正确插入间。粒pcDNA3.1的通用引物M13RC序核普酸序列与文献报道的CrA基因序列。

【参考文献】：
期刊论文
[1]弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒免疫小鼠后的免疫应答[J]. 郭虹,陈观今,郑焕钦,周永安,吕芳丽.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 1999(06)



本文编号：3423095