结核分枝杆菌脂蛋白Rv1016c增强细菌成膜能力和抑制自噬
发布时间：2021-10-08 19:06
目的研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）脂蛋白Rv1016c在Mtb感染和结核病发病中的作用和机制。方法将Mtb脂蛋白Rv1016c基因导入野生耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis, MS）构建重组菌株MS-Rv1016c,比较脂蛋白Rv1016c对菌体生长、成膜能力、细菌聚集、毒力等方面的影响,评估重组菌株MS-Rv1016c对自噬的影响。结果 Rv1016c基因的导入,因过表达脂蛋白使得MS的菌落变大、褶皱增加,使菌体聚集度降低,使细菌成膜速度加快、生物被膜产量增加;Rv1016c显著抑制巨噬细胞自噬,促进细菌在细胞内持留。结论 Rv1016c能够促进MS生物被膜形成,抑制细胞自噬,增强细菌毒力。为研究脂蛋白在Mtb致病机理中的作用提供理论依据。
【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2019,47(04)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鉴定结果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot菌落形态在生长后其菌落呈颗粒注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot
Ｒv1016c菌株表达Ｒv1016c蛋白;Western-blot结果显示，MS-Ｒv1016c表达Ｒv1016c，表明MS-Ｒv1016c构建成功，见图1。注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot。图1MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鉴定结果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot2．2菌落形态MS在生长7d后其菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。MS-Ｒv1016c菌落较大，褶皱较细，边缘比较厚;而MS-p-MV261的菌落较小，整体圆润，褶皱不清晰，见图2。图2MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c菌落形态图(20×)Fig．2ThecharacteristicsforcolonymorphologyofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c(20×)·04·微生物学免疫学进展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4
2．3生长曲线结果显示，MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c在培养8h后都进入对数生长期，36h后均进入平台期。尽管生长曲线略有不同，但两组的生长曲线并无明显差异，见图3。图3MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c生长曲线的测定Fig．3ThegrowthcurvesforMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c2．4聚集度结果显示，各组细菌的数量差异无统计学意义(P＞0．05)，而MS-p-MV261聚集较紧密，聚集度高;MS-Ｒv1016c明显更疏松，聚集度差，见图4。2．5生物膜形成MS-p-MV261形成菌膜较少，菌膜长成较慢，大部分菌体沉降于底部;而MS-Ｒv1016c明显有菌膜，且MS-Ｒv1016c的菌膜更厚，褶皱更多，见图5A。结果显示，MS-Ｒv1016c的成膜量高于MS-p-MV261，差异具有统计学意义(P＜0．05)，见图5B。2．6巨噬细胞自噬分析MS-Ｒv1016c显著抑制了巨噬细胞自噬(P＜0．05)，降低了免疫细胞对细菌的清除作用，见图6。注:NS．差异无统计学意义;A．MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c细菌菌落数量;B．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c细菌聚集度差异检测。图4MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c细菌聚集度差异检测Fig．4TheagglomerationofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016cafterculturefor24h注:*P＜0．05;A．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的观察;B．MS-p-MV261和Ｒv1016c细菌成膜定量。图5MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的观察Fig．5ObservationofbiofilmformationfromMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c微生物学免疫学进展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·14·
本文编号：3424780
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MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鉴定结果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot菌落形态在生长后其菌落呈颗粒注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot
Ｒv1016c菌株表达Ｒv1016c蛋白;Western-blot结果显示，MS-Ｒv1016c表达Ｒv1016c，表明MS-Ｒv1016c构建成功，见图1。注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot。图1MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鉴定结果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot2．2菌落形态MS在生长7d后其菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。MS-Ｒv1016c菌落较大，褶皱较细，边缘比较厚;而MS-p-MV261的菌落较小，整体圆润，褶皱不清晰，见图2。图2MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c菌落形态图(20×)Fig．2ThecharacteristicsforcolonymorphologyofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c(20×)·04·微生物学免疫学进展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4
2．3生长曲线结果显示，MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c在培养8h后都进入对数生长期，36h后均进入平台期。尽管生长曲线略有不同，但两组的生长曲线并无明显差异，见图3。图3MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c生长曲线的测定Fig．3ThegrowthcurvesforMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c2．4聚集度结果显示，各组细菌的数量差异无统计学意义(P＞0．05)，而MS-p-MV261聚集较紧密，聚集度高;MS-Ｒv1016c明显更疏松，聚集度差，见图4。2．5生物膜形成MS-p-MV261形成菌膜较少，菌膜长成较慢，大部分菌体沉降于底部;而MS-Ｒv1016c明显有菌膜，且MS-Ｒv1016c的菌膜更厚，褶皱更多，见图5A。结果显示，MS-Ｒv1016c的成膜量高于MS-p-MV261，差异具有统计学意义(P＜0．05)，见图5B。2．6巨噬细胞自噬分析MS-Ｒv1016c显著抑制了巨噬细胞自噬(P＜0．05)，降低了免疫细胞对细菌的清除作用，见图6。注:NS．差异无统计学意义;A．MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c细菌菌落数量;B．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c细菌聚集度差异检测。图4MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c细菌聚集度差异检测Fig．4TheagglomerationofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016cafterculturefor24h注:*P＜0．05;A．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的观察;B．MS-p-MV261和Ｒv1016c细菌成膜定量。图5MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的观察Fig．5ObservationofbiofilmformationfromMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c微生物学免疫学进展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·14·
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