水痘带状疱疹病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及评价

发布时间：2021-10-21 21:47

　　目的构建表达水痘带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）gE抗原的重组腺病毒载体疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法采用AdEasy系统构建携带gE基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-gE,PCR及Western blot法鉴定AD293细胞系包装的重组腺病毒rAd-gE,采用阴离子和复合介质Capto Core 700两步法对其进行纯化。以3. 3×10⁶、1×10⁷、3×10⁷ifu剂量的rAd-gE分别单针肌内注射免疫NIH小鼠,检测小鼠血清抗体滴度。结果 PCR及PacⅠ酶切鉴定表明,携带gE基因的pAdEasy-gE构建成功;PCR及Western blot分析显示,AD293细胞系成功包装可表达gE糖蛋白的rAd-gE;经两步法纯化,可回收18. 2%的rAd-gE。1×10⁷和3×10⁷ ifu剂量的rAd-gE可引起小鼠的体液免疫响应。结论已成功构建表达高度糖基化gE糖蛋白的rAd-gE,可有效引起小鼠的体液免疫响应,为VZV新型重组腺... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(01)CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、细胞及菌株
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂及仪器
    1.4 引物设计及合成
    1.5 重组腺病毒穿梭质粒pS-C-g E的构建及鉴定
    1.6 质粒pAdEasy-g E的构建及鉴定
    1.7 rAd-g E的包装
    1.8 目的糖蛋白rAd-g E表达的鉴定
    1.9 rAd-g E的扩增及纯化
    1.1 0 小鼠免疫原性检测
    1.1 1 小鼠血清抗体水平的检测
    1.1 2 统计学分析
2 结果
    2.1 质粒pS-C-g E的鉴定
    2.2 质粒pAdEasy-g E的鉴定
    2.3 rAd-g E的鉴定
    2.4 纯化的rAd-g E的鉴定
    2.5 rAd-g E的免疫原性
3 讨论



本文编号：3449773