PTA1/CD226转基因小鼠胸腺细胞的发育研究

发布时间：2021-10-29 00:06

　　目的：建立四环素调控的mPTA1／CD226转基因小鼠，对转基因小鼠胸腺细胞的发育进行研究。 方法：①使用pcDNA3-mPTA1和pBI-5载体构建用于四环素调控转基因小鼠制备的pBI-5-mPTA1载体。②采用显微注射的方法将pBI-5-mPTA1载体片段导入B6D1F1小鼠受精卵，对新生小鼠耳成纤维细胞进行体外培养，用含rtTA的pUHD17.1质粒转染细胞，选出荧光素酶表达活性依赖Dox的小鼠。③将阳性小鼠与正常C57BL／6小鼠交配，分别使用mPTA1和荧光素酶（luciferase）引物对子代小鼠的基因组DNA进行PCR检测和鉴定，选取双阳性的Ptet-mPTA1转基因小鼠的F1代，将其继续与C57BL／6小鼠交配，不断得到子代小鼠，直至F4代以后。④将阳性的Ptet-mPTA1转基因小鼠与携带有tTA的EμSR-tTA转基因小鼠杂交，得到子代小鼠，同时使用mPTA1和tTA引物对其基因组DNA进行PCR检测，选取mPTA1和tTA双阳性的小鼠。⑤使用荧光素酶检测试剂盒对杂交的阳性小鼠的不同组织，如胸腺、脾脏、心脏、肾脏等进行 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TN细胞的分化和发育

通过阳性选择和阴性选择，绝大多数的胸腺细胞发生凋亡，只有不足5%的细胞最终发育为CD4或CDS单阳性细胞，离开胸腺进入循环成为成熟T细胞(图2)8]f。在选择过程中，胸腺基质细胞上自身肤一MHCI类或11类分子复合物与胸腺细胞TCR的相互作用起关键作用，此外，有一些细胞砧附分子在整个过程中也发挥着重要的调节作用。最近的研究表明，在阳性选择的过程中，DP细胞与胸腺基质细胞可以形成动态的免疫突触，这与阴性选择过程中形成的稳定长效的免疫突触具有很大的不同，但这两种免疫突触与成熟T细胞活化过程中形成的免疫突触都不相同件川。因此有学者推断，在胸腺细胞的发育过程中，由脂筏中信号分子和细胞骨架蛋白重新分布形成的免疫突触可能提供细胞存活信号，而影响免疫突触形成的因素也可能同时影响T细胞的选择〔’2】。此外

yliitp袍R)的DNA结合结构域白16(virionprotein16ofhe印essimplexviurs，Vp域融合构成。素调控系统的结构和原理系统包括了两个部分，第一部分是调控部分，tTA在组动子的控制下组成型表达;第二部分包含目的基因，它菌ett操纵子序列(ett叩erator，etot)的人巨细胞病毒aminimalpromotersequeneeofhteh切mnaeytomegaloviurv)的调控。在没有盐酸强力霉素(doxycyeline，oox生物存在的情况下，tAT可以结合etto而活化Pcmv，的基因的转录。当Dox存在时，其可以结合tAT，从使它从etto上解离下来，终止下游目的基因的转录[39]

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠PTA1/CD226分子参与杀伤性T细胞（CTL）的分化[J]. 徐向升,张贇,张新海,庄然,曹云新,金伯泉.  中华微生物学和免疫学杂志. 2006(01)
[2]CD226在NK细胞亚群上表达规律与功能关系的研究[J]. 张赟,贾卫,韩卫宁,曹云新,金伯泉.  中国免疫学杂志. 2004(11)
[3]小鼠CD226（PTA1）的基因克隆及其异型[J]. 张新海,李德敏,欧阳为明,贾卫,谢鑫,陈丽华,宁双飞,张赟,金伯泉.  中国免疫学杂志. 2002(06)
[4]PTA1单克隆抗体诱导人血小板活化聚集和胞浆Ca2+水平的升高[J]. 孙忱,金伯泉,刘雪松,杨琨,张婷婷,董邦权,李家增,武怀珠,彭林,包承鑫,武文杰.  中华血液学杂志. 1998(03)



本文编号：3463573