小鼠干扰素γ受体β基因启动子荧光报告载体构建及转录活性分析

发布时间：2021-10-31 00:49

　　目的 克隆小鼠干扰素γ受体β（Ifngr2）基因启动子，并应用双荧光素酶报告系统对其进行功能分析。方法 首先应用欧洲启动子在线数据库（EPD）获得小鼠Ifngr2 基因的启动子区域，包含转录起始位点在内的-1344⁺48的DNA序列。然后以小鼠MEF细胞基因组DNA为模板，利用PCR扩增调取该序列，并进一步插入 p GL4.19-luc2CP 荧光素酶报告载体。通过 PCR 扩增获得启动子系列截短体并分别插入p GL4.19-luc2CP载体，共获得包含6个不同长度启动子序列的荧光素酶报告载体。进一步通过双荧光报告实验检测不同截短体对Ifngr2基因转录活性影响，确定其影响转录活性的关键区域。通过点突变探究潜在转录因子对Ifngr2基因转录的影响。结果 成功构建小鼠Ifngr2基因启动子荧光素酶报告载体，获得有转录活性的启动子报告基因载体。启动子系列截短分析显示，-132^-97 和-1059^-727 包含启动子重要元件。生物信息学分析发现，在-132^-97 区域内存在潜在的 NF-κB 结合位点，进... 

【文章来源】：中国药理学与毒理学杂志. 北大核心

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本文编号：3467727