大鼠钠/碘同向转运体（rNIS）cDNA克隆和在大肠杆菌的表达

发布时间：2021-11-03 01:28

　　钠／碘同向转运体（NIS）是位于甲状腺滤泡细胞基底膜上的一种糖蛋白，介导甲状腺激素合成的第一步，即碘的主动转运。NIS在甲状腺的病理生理中举足轻重，近年来它已成为碘缺乏病和其他甲状腺疾病防治领域的研究热点。 本研究工作中，笔者以大鼠cDNA文库为模板，PCR方法扩增出全长大鼠NIS基因编码序列，克隆入pGEM-T Easy载体。然后将目的片段分别插入非融合型原核表达载体pBV220和融合型原核表达载体pGEX-3X中。重组表达质粒pBV220／NIS和pGEX-3X／NIS分别转化到大肠杆菌DH5 α和BL21（DE3）中诱导表达。据SDS-PAGE电泳我们发现前者未见明显表达，而后者有期望蛋白表达。以GST标签抗体行Western blotting进一步鉴定该融合蛋白。优化表达条件并对包涵体进行分离、溶解和复性处理，使得融合蛋白的产量达总蛋白的58％，相当于1.02g／每升培养物。 本实验在大肠杆菌中成功表达了大鼠NIS基因，为基因工程制备NIS蛋白奠定了基础。 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

lYIS扩姗

pGEM-TFJNIS的鉴定

pBV220/NIS的两切鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较[J]. 剧海,梁东春,郭刚,张镜宇.  天津医药. 2003(05)
[2]谷氨酸脱羧酶抗体的检测方法及临床意义[J]. 任卫东,贾淑琴,刘文淑.  医学综述. 1999(06)



本文编号：3472769