原代大鼠主动脉内皮细胞衰老模型的建立
发布时间：2021-11-06 12:09
目的建立血管衰老模型,观察比较高葡萄糖（HG）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、过氧化氢（H2O2）及棕榈酸（PA）对原代大鼠主动脉内皮细胞（RAEC）诱导衰老作用。方法取2月龄雄性Wistar大鼠,组织贴块法提取原代RAEC并采用免疫荧光细胞化学染色检测CD31的表达并进行鉴定。分别应用30 mmol/L葡萄糖（HG）、 10μmol/L AngⅡ、 100μmol/L H2O2、 0.5 mmol/L PA处理原代RAEC 24 h。采用β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老情况,实时荧光定量PCR检测衰老相关基因P16 mRNA的水平, Western blot法检测衰老相关基因P16、 P21、 P53蛋白水平;免疫荧光细胞化学染色观察P16的表达, CCK-8法观察细胞存活率。结果与对照组相比,各处理组RAEC中β-半乳糖苷酶染色细胞增加,以H2O2、 PA处理组更明显; HG、 AngⅡ、 H2O2、 PA处理均可...
【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(03)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
分析．1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．bP＜0．01vs1．图2ＲAEC的衰老相关SA-β-gal染色结果A:ＲAEC的SA-β-gal活性(SA-β-gal染色
A:实时定量PCＲ检测ＲAEC的P16mＲNA水平;B:Westernblot法检测ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平;C:ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平的半定量分析．1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．aP＜0．05，bP＜0．01vs1．图3ＲAEC的P16、P21、P53水平A:对照组;B:HG处理组;C:AngⅡ处理组;D:H2O2处理组;E:PA处理组．图4ＲAEC的P16表达(免疫荧光细胞化学染色，×400)2．5H2O2和PA处理降低ＲAEC存活率CCK-8法检测细胞存活率，结果发现HG处理组与AngⅡ处理组细胞存活率与对照组相当，而H2O2处理组与PA处理组细胞存活率显著降低，差异有统计学意义(P＜0．01，图5)。1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．bP＜0．01vs1．图5ＲAEC细胞存活率3讨论血管老化是促进心血管疾病发生的重要危险因素，而内皮细胞衰老是血管整体老化的重要病理生理改变之一［17］。欲深入研究血管内皮细胞衰老及抗衰老的相关机制，首先要成功构建血管内皮细胞衰老模型，本研究提取纯化ＲAEC，观察HG、AngⅡ、H2O2、高脂对主动脉内皮细胞诱导衰老的作用。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是调节细胞增殖的重要信号分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通过与细胞周期蛋白(cyclin)竞争细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，减少cyclin/CDK复?
G处理组;C:AngⅡ处理组;D:H2O2处理组;E:PA处理组．图4ＲAEC的P16表达(免疫荧光细胞化学染色，×400)2．5H2O2和PA处理降低ＲAEC存活率CCK-8法检测细胞存活率，结果发现HG处理组与AngⅡ处理组细胞存活率与对照组相当，而H2O2处理组与PA处理组细胞存活率显著降低，差异有统计学意义(P＜0．01，图5)。1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．bP＜0．01vs1．图5ＲAEC细胞存活率3讨论血管老化是促进心血管疾病发生的重要危险因素，而内皮细胞衰老是血管整体老化的重要病理生理改变之一［17］。欲深入研究血管内皮细胞衰老及抗衰老的相关机制，首先要成功构建血管内皮细胞衰老模型，本研究提取纯化ＲAEC，观察HG、AngⅡ、H2O2、高脂对主动脉内皮细胞诱导衰老的作用。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是调节细胞增殖的重要信号分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通过与细胞周期蛋白(cyclin)竞争细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，减少cyclin/CDK复合物形成，阻止DNA合成基因的转录，从而导致细胞周期阻滞，促使细胞衰老。既往研究证实，P16、P21和P53的转录产物作为标志物在衰老细胞中普遍增加［18－19］。因此，本研究采用上述指标作为内皮细胞衰老的功能标志物，评价细胞衰老程度。葡萄糖是一种人体必需的营养物质，正常情况下参与机体的各项生理过程，但过量的葡萄糖在诱导血管内皮细胞的损伤、
【参考文献】：
期刊论文
[1]D-半乳糖刺激小鼠睾丸TM4支持细胞分泌功能的衰退及其机制[J]. 陈茜,赵海霞,马娜,尤旭,杨思琪,马琼艳,袁丁,张长城. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(04)
[2]血管内皮细胞衰老的研究进展[J]. 周智辉,戴亚蕾. 同济大学学报(医学版). 2014(02)
[3]137Cs γ-射线诱导小鼠胚胎成纤维细胞衰老模型的建立[J]. 路璐,黄颂,李德冠,张俊伶,邢永华,李程程,孟爱民. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(01)
本文编号：3479807
【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(03)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
分析．1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．bP＜0．01vs1．图2ＲAEC的衰老相关SA-β-gal染色结果A:ＲAEC的SA-β-gal活性(SA-β-gal染色
A:实时定量PCＲ检测ＲAEC的P16mＲNA水平;B:Westernblot法检测ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平;C:ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平的半定量分析．1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．aP＜0．05，bP＜0．01vs1．图3ＲAEC的P16、P21、P53水平A:对照组;B:HG处理组;C:AngⅡ处理组;D:H2O2处理组;E:PA处理组．图4ＲAEC的P16表达(免疫荧光细胞化学染色，×400)2．5H2O2和PA处理降低ＲAEC存活率CCK-8法检测细胞存活率，结果发现HG处理组与AngⅡ处理组细胞存活率与对照组相当，而H2O2处理组与PA处理组细胞存活率显著降低，差异有统计学意义(P＜0．01，图5)。1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．bP＜0．01vs1．图5ＲAEC细胞存活率3讨论血管老化是促进心血管疾病发生的重要危险因素，而内皮细胞衰老是血管整体老化的重要病理生理改变之一［17］。欲深入研究血管内皮细胞衰老及抗衰老的相关机制，首先要成功构建血管内皮细胞衰老模型，本研究提取纯化ＲAEC，观察HG、AngⅡ、H2O2、高脂对主动脉内皮细胞诱导衰老的作用。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是调节细胞增殖的重要信号分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通过与细胞周期蛋白(cyclin)竞争细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，减少cyclin/CDK复?
G处理组;C:AngⅡ处理组;D:H2O2处理组;E:PA处理组．图4ＲAEC的P16表达(免疫荧光细胞化学染色，×400)2．5H2O2和PA处理降低ＲAEC存活率CCK-8法检测细胞存活率，结果发现HG处理组与AngⅡ处理组细胞存活率与对照组相当，而H2O2处理组与PA处理组细胞存活率显著降低，差异有统计学意义(P＜0．01，图5)。1:对照组;2:HG处理组;3:AngⅡ处理组;4:H2O2处理组;5:PA处理组．bP＜0．01vs1．图5ＲAEC细胞存活率3讨论血管老化是促进心血管疾病发生的重要危险因素，而内皮细胞衰老是血管整体老化的重要病理生理改变之一［17］。欲深入研究血管内皮细胞衰老及抗衰老的相关机制，首先要成功构建血管内皮细胞衰老模型，本研究提取纯化ＲAEC，观察HG、AngⅡ、H2O2、高脂对主动脉内皮细胞诱导衰老的作用。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是调节细胞增殖的重要信号分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通过与细胞周期蛋白(cyclin)竞争细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，减少cyclin/CDK复合物形成，阻止DNA合成基因的转录，从而导致细胞周期阻滞，促使细胞衰老。既往研究证实，P16、P21和P53的转录产物作为标志物在衰老细胞中普遍增加［18－19］。因此，本研究采用上述指标作为内皮细胞衰老的功能标志物，评价细胞衰老程度。葡萄糖是一种人体必需的营养物质，正常情况下参与机体的各项生理过程，但过量的葡萄糖在诱导血管内皮细胞的损伤、
【参考文献】：
期刊论文
[1]D-半乳糖刺激小鼠睾丸TM4支持细胞分泌功能的衰退及其机制[J]. 陈茜,赵海霞,马娜,尤旭,杨思琪,马琼艳,袁丁,张长城. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(04)
[2]血管内皮细胞衰老的研究进展[J]. 周智辉,戴亚蕾. 同济大学学报(医学版). 2014(02)
[3]137Cs γ-射线诱导小鼠胚胎成纤维细胞衰老模型的建立[J]. 路璐,黄颂,李德冠,张俊伶,邢永华,李程程,孟爱民. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(01)
本文编号：3479807
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