鲍曼不动杆菌外膜蛋白A慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活

发布时间：2021-11-12 18:02

　　目的建立OmpA过表达慢病毒载体并观察其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活。方法以鲍曼不动杆菌ATCC 19606为模板,设计引物扩增OmpA基因,将其克隆至慢病毒表达载体pCDH-MSCV-copGFP中。将此表达质粒和辅助质粒共转染HEK293T细胞包装病毒,浓缩病毒上清液并用GFP报告基因法测定病毒滴度;用包装病毒颗粒感染RAW264.7细胞48h,Real-time PCR法检测OmpA的mRNA表达水平,用Western blot法检测OmpA蛋白以及感染后NLRP3炎症小体相关蛋白。结果成功构建OmpA过表达慢病毒载体并在HEK293T细胞中包装得到病毒,经测定病毒滴毒为1.5×109 TU/mL;重组OmpA病毒感染RAW264.7细胞表达OmpA蛋白,该蛋白能引起NLRP3炎症小体激活。结论成功构建OmpA过表达慢病毒载体并证明OmpA可激活RAW264.7细胞NLRP3炎症小体。 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(02)北大核心CSCD

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【部分图文】：

图２慢病毒包装ＨＥＫ２９３Ｔ细胞荧光检测Ｆｉｇ．２ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ

【参考文献】：
期刊论文
[1]芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体的影响[J]. 张涵,索绪斌,张云凌,姚琳,许庆瑞,张树明,王伟明.  中国病原生物学杂志. 2017(10)



本文编号：3491407