用于子孢子检测的单克隆抗体的制备及相关研究

发布时间：2021-11-18 19:10

　　本研究旨在制备针对疟原虫环子孢子蛋白（CSP）保守Ⅱ⁺区及糖酵解途径中的醛缩酶（ALD）的单克隆抗体，探索其用于子孢子检测的可行性。 采用恶性疟原虫CSP保守Ⅱ⁺区多肽免疫BALB／c小鼠，获得3株分泌针对保守Ⅱ⁺区的杂交瘤细胞株。ELISA检测显示获得的单克隆抗体能与重组表达的恶性疟原虫CSP片段特异性反应，与蚊虫组织无反应。间接免疫荧光试验（IFA）显示，单克隆抗体不仅能识别恶性疟原虫子孢子，也能识别约氏疟原虫子孢子，但与约氏疟原虫子孢子反应的荧光强度明显弱于与恶性疟原虫子孢子的反应。 克隆恶性疟原虫海南株ALD编码区基因，在大肠杆菌表达获得可溶性蛋白。纯化蛋白免疫BALB／c小鼠，获得7株分泌针对ALD的杂交瘤细胞株。IFA显示有4株能识别培养的恶性疟原虫，与恶性疟原虫有反应的4株中有2株能识别约氏疟原虫。 该项研究的资料可为研究媒介体内原虫监测以及有性期原虫的糖代谢过程提供基础资料。 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组质粒pQE一30图谱

mMIPTG诱导表达。表达产物经12%SDS一PAGE电泳，考马斯亮蓝染色。ALD的理论分子量约40.8kDa。诱导后在41kDa处出现特异性表达条带，该条带浓度随诱导时间的延长而逐渐加深(图6)。图6大肠杆菌诱导表达ALD的SDS一PAGE分析l对照组培养物(无IPTG)培养6h2蛋白标志物(叨a)3一9IPTG诱导表达oh、lh、Zh、3h、4h、sh、6hF19.6AnalysisoftheALDProteinexPressedinM151Non一indueedM15withreeombinantPQE一30/ALDeulturedfor6h2proteinMarker(kDa)3一9M15withreeombinantPQE一30/ALDindueedforoh，lh，Zh，3h，4h，sh，6h3.纯化表达产物扩大培养sh后，收集菌体纯化蛋白。超声破菌后分别收集上清和沉淀，12%SDS一PAGE电泳显示目的蛋白是以可溶性形式存在于大肠杆菌裂解后的上清中。上清液经过滤、透析后过镍—次氮基三醋酸(Ni一TA)柱。12%SDS一PAGE电泳显示过柱后

化结果1洗涤液2柱后3洗脱液4总蛋白5蛋白质标志物nbyNi一NTA(kDa)1washingbuffer2afterthroughNi一NTAr4suPemantoflysis5TotalProteinofM156ProteinMar

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3503454