Fbxo22基因敲除小鼠模型的建立和表型研究
发布时间：2021-11-27 15:55
目的·分析Fbxo22基因敲除小鼠的表型,为探索FBXO22的生物学功能提供理论依据。方法·利用CRISPR-Cas9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR associated protein 9）技术成功构建Fbxo22全身敲除小鼠,观察胚胎和小鼠的外观,测定其数量和质量,并分析小鼠的进食量和存活时间。结果·Fbxo22敲除小鼠胚胎期17.5/18.5 d的胚胎数量符合孟德尔遗传定律,外观未见异常,但是多数Fbxo22敲除小鼠在出生后48 h内死亡。少数存活小鼠体型偏小,进食减少,存活时间缩短。结论·FBXO22对于小鼠出生后早期存活和正常发育有重要作用。
【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2019,39(04)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Fbxo22敲除小鼠构建及基因型鉴定Fig1GenerationofFbxo22knockoutmice注：A.sgRNA识别Fbxo22的3号外显子示意
355http://xuebao.shsmu.edu.cn上海交通大学学报（医学版），2019，39(4)2.2FBXO22缺失对胚胎发育以及出生后存活的影响为了检测FBXO22对胚胎发育的影响，首先通过分析不同胚胎时期各个基因型胚胎的数量，观察FBXO22缺失是否影响胚胎存活。在胚胎期14.5d（E14.5），Fbxo22+/+、Fbxo22+/-和Fbxo22-/-的数量分别为28、53和21；在E17.5/18.5，Fbxo22+/+、Fbxo22+/-和Fbxo22-/-的数量分别为29、46和27，符合孟德尔遗传定律（表2）。此外，E13.5、E14.5和E17.5/18.5的胚胎外观和E17.5/18.5的胚胎质量均未见异常（图3A和3B）。这些结果提示FBXO22缺失对胚胎数量、外观和质量无明显影响，即对胚胎发育无明显影响。然而，我们发现大量小鼠在出生后48h内死亡。通过鉴定这些死亡小鼠和存活到3周龄的小鼠的基因型，发现87.27%的Fbxo22-/-小鼠在出生后48h内死亡，而Fbxo22+/+与Fbxo22-/-小鼠死亡的比例仅为13.30%和17.85%（表3）。这些结果表明Fbxo22-/-小鼠在胚胎发育期无明显异常而多数在出生后48h内死亡，所以Fbxo22-/-成年小鼠得率非常低。注：A.sgRNA识别Fbxo22的3号外显子示意图。黑色方框所示为sgRNA靶向序列，PAM序列用蓝色标记。B.F1代基因型分析。虚线代表缺失碱基，红色代表插入碱基；插入（+）、缺失（-）情况在每一行的右端显示；WT表示野生型，1#、2#、5#、6#分别为F1代小鼠编号。图1Fbxo22敲除小鼠构建及基因型鉴定Fig1GenerationofFbxo22knockoutmice图2用Westernblotting方法验证FBXO22在不同组织的表达情况Fig2ExpressionofFBXO22indifferenttissuesconfirmedbyWesternblotting表2FBXO22缺失对小鼠胚胎数量的影响（n）Tab2EffectofFBXO22deletiononthenumberofembryos(n)胚胎期Fbxo22+/+Fbxo22+/-Fbxo22-/-E14.5285321E17.5/18
356上海交通大学学报（医学版）2019,39(4)JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)Vol.39No.4Apr.20192.3FBXO22缺失对成年小鼠体型、进食以及生存期的影响少数Fbxo22-/-小鼠可存活到3周龄以上，进一步观察FBXO22缺失对出生后小鼠的生长有无影响。Fbxo22-/-小鼠的体型和体质量明显小于Fbxo22+/+小鼠，约为后者的50%，并且Fbxo22-/-小鼠的毛色没有Fbxo22+/+小鼠鲜亮，这提示FBXO22缺失可能导致小鼠生长迟缓（图4A和4B）。此外，Fbxo22-/-小鼠每日饲料用量约为Fbxo22+/+小鼠的50%，每日水用量亦少于Fbxo22+/+小鼠，表明FBXO22缺失后小鼠的进食量明显减少（图4C和4D）。此外，Fbxo22-/-小鼠的存活时间为7～8周，显著短于Fbxo22+/+小鼠（图4E）。但是，如果小鼠3周龄时不离乳饲养，Fbxo22-/-小鼠体质量的增长速度与Fbxo22+/+小鼠无明显差别（图4F），并且Fbxo22-/-小鼠的生存期可明显延长，约为21周（图4G）。因此，FBXO22缺失可引起小鼠体型减小，体质量减轻，进食量减少。注：A.E13.5、E14.5和E17.5/18.5的胚胎外观；B.E17.5/18.5的胚胎质量。图3FBXO22缺失对胚胎发育的影响Fig3EffectofFBXO22deletiononembryonicdevelopment注：Fbxo22+/+和Fbxo22-/-成年小鼠的体型（A）、体质量（B）、食物（C）和水（D）摄取量（n=7）以及生存期（E，n=4）。不离乳饲养的Fbxo22+/+和Fbxo22-/-成年小鼠的体质量增长（F）和生存期（G，n=3）。①P=0.000，②P=0.003，③P=0.010，④P=0.025，与Fbxo22+/+组比较。图4FBXO22缺失对小鼠体型、进食和生存期的影响Fig4EffectofFBXO22deletiononmousebodysize,foodintakeandsurvivalABAEBFCGD
本文编号：3522605
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Fbxo22敲除小鼠构建及基因型鉴定Fig1GenerationofFbxo22knockoutmice注：A.sgRNA识别Fbxo22的3号外显子示意
355http://xuebao.shsmu.edu.cn上海交通大学学报（医学版），2019，39(4)2.2FBXO22缺失对胚胎发育以及出生后存活的影响为了检测FBXO22对胚胎发育的影响，首先通过分析不同胚胎时期各个基因型胚胎的数量，观察FBXO22缺失是否影响胚胎存活。在胚胎期14.5d（E14.5），Fbxo22+/+、Fbxo22+/-和Fbxo22-/-的数量分别为28、53和21；在E17.5/18.5，Fbxo22+/+、Fbxo22+/-和Fbxo22-/-的数量分别为29、46和27，符合孟德尔遗传定律（表2）。此外，E13.5、E14.5和E17.5/18.5的胚胎外观和E17.5/18.5的胚胎质量均未见异常（图3A和3B）。这些结果提示FBXO22缺失对胚胎数量、外观和质量无明显影响，即对胚胎发育无明显影响。然而，我们发现大量小鼠在出生后48h内死亡。通过鉴定这些死亡小鼠和存活到3周龄的小鼠的基因型，发现87.27%的Fbxo22-/-小鼠在出生后48h内死亡，而Fbxo22+/+与Fbxo22-/-小鼠死亡的比例仅为13.30%和17.85%（表3）。这些结果表明Fbxo22-/-小鼠在胚胎发育期无明显异常而多数在出生后48h内死亡，所以Fbxo22-/-成年小鼠得率非常低。注：A.sgRNA识别Fbxo22的3号外显子示意图。黑色方框所示为sgRNA靶向序列，PAM序列用蓝色标记。B.F1代基因型分析。虚线代表缺失碱基，红色代表插入碱基；插入（+）、缺失（-）情况在每一行的右端显示；WT表示野生型，1#、2#、5#、6#分别为F1代小鼠编号。图1Fbxo22敲除小鼠构建及基因型鉴定Fig1GenerationofFbxo22knockoutmice图2用Westernblotting方法验证FBXO22在不同组织的表达情况Fig2ExpressionofFBXO22indifferenttissuesconfirmedbyWesternblotting表2FBXO22缺失对小鼠胚胎数量的影响（n）Tab2EffectofFBXO22deletiononthenumberofembryos(n)胚胎期Fbxo22+/+Fbxo22+/-Fbxo22-/-E14.5285321E17.5/18
356上海交通大学学报（医学版）2019,39(4)JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)Vol.39No.4Apr.20192.3FBXO22缺失对成年小鼠体型、进食以及生存期的影响少数Fbxo22-/-小鼠可存活到3周龄以上，进一步观察FBXO22缺失对出生后小鼠的生长有无影响。Fbxo22-/-小鼠的体型和体质量明显小于Fbxo22+/+小鼠，约为后者的50%，并且Fbxo22-/-小鼠的毛色没有Fbxo22+/+小鼠鲜亮，这提示FBXO22缺失可能导致小鼠生长迟缓（图4A和4B）。此外，Fbxo22-/-小鼠每日饲料用量约为Fbxo22+/+小鼠的50%，每日水用量亦少于Fbxo22+/+小鼠，表明FBXO22缺失后小鼠的进食量明显减少（图4C和4D）。此外，Fbxo22-/-小鼠的存活时间为7～8周，显著短于Fbxo22+/+小鼠（图4E）。但是，如果小鼠3周龄时不离乳饲养，Fbxo22-/-小鼠体质量的增长速度与Fbxo22+/+小鼠无明显差别（图4F），并且Fbxo22-/-小鼠的生存期可明显延长，约为21周（图4G）。因此，FBXO22缺失可引起小鼠体型减小，体质量减轻，进食量减少。注：A.E13.5、E14.5和E17.5/18.5的胚胎外观；B.E17.5/18.5的胚胎质量。图3FBXO22缺失对胚胎发育的影响Fig3EffectofFBXO22deletiononembryonicdevelopment注：Fbxo22+/+和Fbxo22-/-成年小鼠的体型（A）、体质量（B）、食物（C）和水（D）摄取量（n=7）以及生存期（E，n=4）。不离乳饲养的Fbxo22+/+和Fbxo22-/-成年小鼠的体质量增长（F）和生存期（G，n=3）。①P=0.000，②P=0.003，③P=0.010，④P=0.025，与Fbxo22+/+组比较。图4FBXO22缺失对小鼠体型、进食和生存期的影响Fig4EffectofFBXO22deletiononmousebodysize,foodintakeandsurvivalABAEBFCGD
本文编号：3522605
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