重组CHO细胞高效表达乙肝表面抗原的研究

发布时间：2021-11-28 01:25

　　目前，全世界有 3.5～4 亿人为慢性乙肝病毒携带者，其中九千万人发展成继发性肝病。我国是 HBV 感染的高发区，约 1.7 亿人受 HBV 感染，一千七百万人患慢性肝炎。每年死于 HBV 导致的肝癌，肝硬化者约五十万人。 接种乙肝疫苗是预防治乙肝病毒传播的重要手段。目前，生产乙肝疫苗有酵母和 CHO 细胞两种表达系统，其中利用 CHO 细胞表达的 HBsAg 作为疫苗具有免疫原性强，阳转率高的优点，但产量低是目前遇到的主要问题。 本项工作的目的是构建高效表达 HBsAg 的重组 CHO 工程细胞。首先，我们对 S 基因进行了改造。我们提取目前生产使用的工程细胞 C28 的基因组，并根据 S 基因两端 DNA 序列设计一组引物 S 正和 S 反扩增 S 基因片段。我们采用重叠 PCR 技术将 S 基因中 213，216，224 位三个稀有密码子替换成哺乳动物细胞偏爱的密码子，即 213TTA→ CTG； 216 TTA→ CTG； 224 GTA→GTG。得到 Sm。测序结果表明我们突变获得成功。 其次，我们构建了两个表达载体 P1 和 P4，在构建或选择 CHO 细... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

利用重叠PCR突变S基因Fig.3.2theSgenemutationbyoverlappingPCR

组 PCR 反 2μL组 PCR 产物 2μLaq 0.5μL 32.5μLl 50μL于以下条件进行 5 个循环：95 ℃ 30s，33℃ 系中加入 S 正 1 和 S 反 1 引物各 2μL，电泳回收 PCR 产物。将回收产物与 T JM109 感受态细胞。挑选转化子，送上和鉴定方法 pCI-neo 表达载体（见图 3.3）的基础上是经改造的 Sm基因，DHFR 基因的顺式基因的表达。构建模式图见图 3.4。

P1载体的构建图

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3523416