支原体巨噬细胞活化脂肽-2经Btk/PI3K/Nrf2通路诱导单核细胞表达HO-1
发布时间：2021-12-02 19:02
目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2）诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（hemeoxygenase,HO-1）的分子机制。方法体外培养THP-1细胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR检测HO-1 mRNA的表达,Western blot检测其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1细胞与不同浓度的Bruton’酪氨酸激酶（Bruton’s tyrosine kinase,Btk）抑制剂LFM-A13作用1 h,随后用MALP-2刺激12 h,Western blot观察其对HO-1表达以及Akt磷酸化的影响;分别采用EMSA和免疫荧光检测核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位,并观察PI3K抑制剂LY294002对Nrf2的激活和DNA结合活性的改变情况;siRNA干扰Nrf2表达,以证实其在HO-1表达中的作用;最后,采用LFM-A13和血红素处理THP-1细胞,MTT法检测细胞的存活率。结果 MALP-2处理可显著诱导THP-1细胞表达HO-1蛋白和m...
【文章来源】：免疫学杂志. 2014,30(08)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
MALP-2经Btk诱导PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2
胞活性降低至37%。若同时加入HO-1激动剂CoPP以诱导HO-1表达，细胞活性增高至56%（图5）。3讨论本研究采用的MALP-2是根据发酵支原体细胞膜脂蛋白结构特征人工合成的一种脂肽，它具有几乎所有支原体膜脂蛋白的免疫刺激活性（类似于LPS），且能被单核、巨噬细胞TLR2和TLR6受体识别[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的优势是避免了膜脂蛋白提取过程中内毒素污染的可能，因此在研究支原体感染过程中被广泛采用[10]。图3MALP-2经Btk诱导PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration图1Btk特异性抑制剂降低MALP-2诱导THP-1细胞表达HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells图2LFM-A13抑制THP-1细胞HO-1mRNA表达Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.图4PI3K-Nrf2参与调控MALP-2诱导HO-1表达Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression图5LFM-A13增强THP-1细胞对血红素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
?膜脂蛋白结构特征人工合成的一种脂肽，它具有几乎所有支原体膜脂蛋白的免疫刺激活性（类似于LPS），且能被单核、巨噬细胞TLR2和TLR6受体识别[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的优势是避免了膜脂蛋白提取过程中内毒素污染的可能，因此在研究支原体感染过程中被广泛采用[10]。图3MALP-2经Btk诱导PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration图1Btk特异性抑制剂降低MALP-2诱导THP-1细胞表达HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells图2LFM-A13抑制THP-1细胞HO-1mRNA表达Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.图4PI3K-Nrf2参与调控MALP-2诱导HO-1表达Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression图5LFM-A13增强THP-1细胞对血红素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
本文编号：3529008
【文章来源】：免疫学杂志. 2014,30(08)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
MALP-2经Btk诱导PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2
胞活性降低至37%。若同时加入HO-1激动剂CoPP以诱导HO-1表达，细胞活性增高至56%（图5）。3讨论本研究采用的MALP-2是根据发酵支原体细胞膜脂蛋白结构特征人工合成的一种脂肽，它具有几乎所有支原体膜脂蛋白的免疫刺激活性（类似于LPS），且能被单核、巨噬细胞TLR2和TLR6受体识别[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的优势是避免了膜脂蛋白提取过程中内毒素污染的可能，因此在研究支原体感染过程中被广泛采用[10]。图3MALP-2经Btk诱导PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration图1Btk特异性抑制剂降低MALP-2诱导THP-1细胞表达HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells图2LFM-A13抑制THP-1细胞HO-1mRNA表达Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.图4PI3K-Nrf2参与调控MALP-2诱导HO-1表达Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression图5LFM-A13增强THP-1细胞对血红素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
?膜脂蛋白结构特征人工合成的一种脂肽，它具有几乎所有支原体膜脂蛋白的免疫刺激活性（类似于LPS），且能被单核、巨噬细胞TLR2和TLR6受体识别[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的优势是避免了膜脂蛋白提取过程中内毒素污染的可能，因此在研究支原体感染过程中被广泛采用[10]。图3MALP-2经Btk诱导PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration图1Btk特异性抑制剂降低MALP-2诱导THP-1细胞表达HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells图2LFM-A13抑制THP-1细胞HO-1mRNA表达Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.图4PI3K-Nrf2参与调控MALP-2诱导HO-1表达Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression图5LFM-A13增强THP-1细胞对血红素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
本文编号：3529008
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