HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶表达细胞系和重组细胞凋亡酶-3的构建及其应用的研究

发布时间：2021-12-02 20:35

　　丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的传染性疾病，是慢性肝病的主要原因之一。全球范围内HCV感染人数达1.7亿，我国约4000多万人，HCV感染已成为严重的世界公共卫生问题之一。迄今尚无疫苗和特异有效的治疗药物。 鉴于蛋白酶和逆转录酶抑制剂在治疗HIV方面取得良好疗效，以蛋白酶和RNA聚合酶为靶标寻找特异有效的治疗药物已成为HCV感染防治研究的重要方向之一。缺乏可靠的细胞培养系统和小动物实验模型，极大地阻碍了抗HCV药物的筛选，因此以酶分子为靶位的测定系统常作为药物筛选的替代系统。由于候选药物分子必须具有易进入细胞、稳定性好等特征，建立一种细胞水平上酶活性的测定系统对于筛选抗HCV药物无疑有着重要意义。 NS3／4A丝氨酸蛋白酶在多聚蛋白前体加工成熟中起着关键的作用，是抗HCV的主要靶标。鉴于NS3／4A丝氨酸蛋白酶晶体结构、生化特性和切割水解底物的特征，以及细胞凋亡酶3（caspase-3，简写为Casp3）的结构特征和活化方式已经明确。本研究依据Casp3是哺乳动物细胞中重要的凋亡执行分子之一，它的活化必然会引起细胞的凋亡。将 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

单链Ns3一N4sAZI_3;蛋白酶的结构及识别底物序列160】Fig.1ThestruetureofscNS3喇S4A.(a)RibbondiagramofseNS3一S4A，anengineeredmoleculethatconsistsof631NS3residues，14NS4Aresiduesknownto

名为Caspase，称之为细胞凋亡酶;③活性形式都是由两大、两成的异源四聚体。自从第一个Caspase分子(Caspase一)l被发现以来，在哺乳动现了14种同源分子，在果蝇中发现了5种同源分子。哺乳动物C为两类:CIE亚族和CED一3家族，前者参与炎症反应，如Caspase一11、12、13、14等，后者参与细胞凋亡。CED一3家族又分为两为起始分子(initiator)，如Caspase一2、8、9、10，它们接到凋发生自我剪接而激活，引起下游Caspase级联反应;另一类为执(executioner)，如easpase一3、6、7，它们可直接降解胞内的结构能蛋白，引起凋亡。凋亡执行分子的激活是细胞凋亡的最后环Caspase一3起着重要作用(图2)〔’04]。

p810Cp一3激活。:细胞应激反应或凋亡信号能引起线粒体导因子，细胞色素c能与APa-fl、CasPaes一9前体、后召集并激活casP3I’，04‘。，]。这种内源性途径可其它因子(如CZa十)等调控。径既可以独立发挥作用，又可相互交叉，启动后CasP3被上游Caspase分子以反式作用方来描述CasP3被反式作用活化。颗粒酶B首先连接区的特定位点，形成一个具有部分活性间产物自我水解切割原区，生成具有完全活原区也可以被其他凋亡酶以反式作用切割。3所示[，0，]。

【参考文献】：
期刊论文
[1]MTT比色分析法检测卵巢癌药物敏感性[J]. 吕庆杰,马颖,宋继谒,董芳,宓贞.  中国医科大学学报. 2004(06)
[2]MTT法在抗病毒药物筛选中的应用[J]. 刘钊,杨占秋,肖红,文莉,李汝霖,姜旋.  武汉大学学报(医学版). 2004(03)
[3]丙型肝炎防治指南[J].   中华医学杂志. 2004(09)

硕士论文
[1]HCV NS3蛋白的表达、纯化、单克隆抗体制备及其结合区域的分析[D]. 杨敬.第四军医大学 2005



本文编号：3529163