ZS株弓形虫P22基因片段的克隆和表达

发布时间：2022-01-03 12:46

　　目的：研究ZS株弓形虫表膜抗原P22编码基因的克隆和表达。 方法：从ZS株弓形虫基因组中扩增出P22编码基因的位于开放阅读框架（ORF）中的一长496bp的片段，限制性内切酶Pst Ⅰ和BgL Ⅱ双酶切该片段，胶回收纯化，插入表达质粒载体pThioHisA，B，C多克隆位点，构建原核质粒重组体pThioHisA，B，C/P22，并转化E.coli Top 10，筛选阳性克隆，以限制性酶切分析及测序鉴定后，以IPTG进行诱导，在E.coli Top 10中表达，用SDS—PAGE观察重组蛋白表达情况，应用Western-blot分析重组抗原的活性，并纯化表达产物。同时扩增P22编码基因ORF的全长561bp片段，经Pst Ⅰ、Xba Ⅰ双酶切后，定向克隆于质粒pBudCE 4.1，构建真核重组重组表达质粒pBudCE 4.1/P22，通过脂质体介导转染入小鼠巨噬细胞RAW264.7，以RT-PCR方法鉴定目的基因在巨噬细胞中的表达。 结果： 1．从弓形虫ZS株基因组中扩增出P22编码基因的一长496 bp，另一长561bp的片段，并成功构建含P22编码基因的原核质粒重组... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

22编码基因片段PCR产M:DNA标准分子量(DLZO00)1.阴性对照F19I(lentifieatiollofl)CRpro〔

2.重组子pThiollisA，B，C/p22的鉴定分子量(湘1)1.阴性对照2.3.垂组成功质sA，日，C/I，22双酶切9.2.101一r一1if](、at1011()f厂〔·(orz{。irl。日ltl)la:川(}Marker1.rlegatzve(一02:tl·0123.Reco，B，C/P22digestedbypstl、BgL11A，B，C/P22，用该质粒通用引物TrxR、公!d完成测序)。测)J-i结果如I，GAGCTCG八q八且刃江C二白已卫迁工肠人皿CAACGAAGACTGTTG了、TGCACCCTCCAGC飞’AACCAI，CAGTCCCAGTGGCGAAGGTGCGAGGAAGTTGACGACTGTCCTTCCAGGCCGCGAAAGGTCCTGCTACC1’ACACACTGGTTCTCTGT下入CAAG『rGCGTTGCCGAAGTTCI认GCGCTCCGACGCCTAAAGACTG’，’’

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本文编号：3566300