人LIF及OSM转基因细胞的建立及其对脐血CD34～+造血干/祖细胞体外扩增作用的研究

发布时间：2022-01-14 13:04

　　目的:构建稳定表达人白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）及人抑瘤素M（oncostatin M,OSM）基因的人胚胎成纤维细胞,将其作为饲养层细胞,研究其对脐带血CD34⁺造血干/祖细胞（hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC）体外扩增的支持作用。方法:将本科室构建和保存的人LIF和OSM基因真核表达载体pcDNA3.0-hLIF和pcDNA3.1（-）-hOSM经鉴定后采用脂质体转染法分别转入WI-38人胚肺成纤维细胞系中进行表达,通过氨基糖苷类抗生素类似物G418筛选出能够稳定表达目的基因hLIF和hOSM的单细胞克隆。同时尝试构建这两个基因的重组逆转录病毒载体,用逆转录病毒载体介导基因的转移,经zeocin筛选后获得基因修饰的人胚胎成纤维细胞株。采用分子生物学（RT-PCR法）和免疫学（ELISA法）的方法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测目的基因能否在人胚胎成纤维细胞中成功转录和翻译,同时检测真核细胞表达上清中的细胞因子hLIF及hOSM对靶细胞的生物学活性。然后将构建成功... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

质粒抽提后电泳图

2 hLIF、hOSM 基因在 WI-38 细胞中转录的鉴定将实验组 WI38-pcDNA3.0-hLIF、WI38-pcDNA3.1(-)-hOSM 和空载体对照I-38 细胞总 RNA 进行 RT-PCR，其产物经 1.0%琼脂糖凝胶电泳后，两实验组出特异性亮带，而空载体对照组则没有相应的条带（如图 1-3）。上述结果表明 hLSM 基因分别成功地被转入 WI-38 细胞内，并能在 WI-38 细胞中进行转录。图 1-3 转染 WI-38 细胞的 RT-PCR 鉴定

hOSM 基因在 WI-38 细胞中转录的鉴定组 WI38-pcDNA3.0-hLIF、WI38-pcDNA3.1(-)-hOSM 和空载 RNA 进行 RT-PCR，其产物经 1.0%琼脂糖凝胶电泳后，两实，而空载体对照组则没有相应的条带（如图 1-3）。上述结果表别成功地被转入 WI-38 细胞内，并能在 WI-38 细胞中进行转录

【参考文献】：
期刊论文
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[3]抑瘤素M对照射后小鼠造血系统的影响[J]. 聂晶,范永星,赵洪礼.  沈阳部队医药. 2004(04)
[4]抑瘤素M对照射后小鼠造血系统的影响[J]. 聂晶,范永星,赵洪礼.  沈阳部队医药. 2004 (04)
[5]TGF-β1对脐血体外扩增中造血祖细胞生物学特性影响[J]. 郝思国,孙关林,邬维礼,吴英理.  中国实验血液学杂志. 2004(01)



本文编号：3588558