新视角重探小鼠胶质细胞体外培养技术与炎症模型

发布时间：2022-01-15 03:20

　　目的通过比较新材料与传统材料在胶质细胞培养中的优劣及特点,优化小鼠胶质细胞炎症模型。方法利用q PCR、流式细胞术、免疫荧光等手段,表征胶质细胞组成比例与细胞纯度。在LPS刺激下,从mRNA与蛋白水平,评估不同包被材料对细胞炎症反应的影响。结果 LPS(100μg·L^-1)刺激48 h,混合胶质细胞炎症因子表达量明显高于小胶质细胞,如PDL包被时,混合胶质细胞TNF-α表达量为（903. 8±322. 2） ng·L^-1,明显高于小胶质细胞（565. 4±159. 8） ng·L^-1; Matrigel包被时,混合胶质细胞表层的小胶质细胞状态更佳。而小胶质细胞在未包被时,对LPS更为敏感,TNF-α水平为（6861. 4±1606. 6） ng·L^-1。结论 Matrigel包被培养的混合胶质细胞,可最大程度模拟体内环境,为建立胶质细胞炎症模型的最佳条件;评估炎症模型应以蛋白水平检测结果为主要指标。 

【文章来源】：中国药理学通报. 2019,35(07)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 试剂
    1.2 仪器
    1.3 实验动物
2 方法
    2.1 培养材料表面处理
    2.2 细胞悬液制备及培养
    2.3 混合胶质细胞的制备
    2.4 小胶质细胞的制备
    2.5 实时荧光定量PCR检测
    2.6 免疫荧光实验
    2.7 流式细胞术检测
    2.8 吞噬试验
    2.9 液相芯片多因子检测
    2.1 0 统计学分析
3 结果
    3.1 胶质细胞表征
        3.1.1 q PCR表征混合细胞中各类细胞特征性标记物mR-NA相对转录水平随时间的变化
        3.1.2 免疫荧光表征小胶质细胞纯度
        3.1.3 流式细胞术检测混合胶质细胞中各细胞所占的比例
        3.1.4 小胶质细胞吞噬功能检测
    3.2 包被条件对胶质细胞炎症模型评价的影响
        3.2.1 mRNA水平初步探究包被条件对胶质细胞炎症模型评价的影响
            3.2.1. 1 包被条件对混合胶质细胞的影响
            3.2.1. 2 包被条件对小胶质细胞炎症模型评价的影响
        3.2.2 深入探究包被条件对胶质细胞炎症模型评价的影响
            3.2.2. 1 包被条件对混合胶质细胞形态与生长的影响
            3.2.2. 2 包被条件对混合胶质细胞炎症模型评价的影响
            3.2.2. 3 包被条件对小胶质细胞炎症模型评价的影响
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞共培养模型及其在中枢神经系统疾病研究中的应用[J]. 杨盛,何然,张飞燕,薛强,徐晓玉.  药学学报. 2016(03)
[2]阿魏酸对小胶质细胞炎性反应的抑制作用[J]. 吴建良,沈敏敏,杨水新,王翔,马增春.  中国药理学通报. 2015(01)



本文编号：3589799