基于Tet-On系统构建Alb启动子调控猪uPA转基因表达的慢病毒载体

发布时间：2022-01-15 05:01

　　目的应用Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控小型猪uPA （pig urokinase-type plasminogen activator,puPA）基因表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP（pLATTPUTG）。方法首先将pAlb-Cre-GH/BS作为模板,PCR扩增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion克隆至Xho I/Xba I双酶切的pLVX-TetOne中,获得Alb启动子替换pLVX-TetOne原有的PGK启动子的质粒pLVX-Alb-TetOne;接着以pCD823 A-1为模板,PCR扩增T2A-CopGFP,In-Fusion克隆至BamH I/Age I酶切的pLVX-Alb-TetOne中,获得pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP（pLATTTG）;最后以H8803为模板,PCR扩增puPA（3′端含Flag标签）,In-Fusion克隆至pLATTTG中,最终获得慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGF... 

【文章来源】：中国比较医学杂志. 2019,29(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 载体
        1.1.2 细胞
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 基于Tet-On3G系统构建Alb启动子调控小型猪uPA转基因肝细胞特异性表达的慢病毒载体pLATTPUTG
        1.3.2 pLATTPUTG体外功能验证
    1.4 统计学方法
2 结果
    2.1 慢病毒载体pLATTPUTG构建和鉴定
        2.1.1 构建载体pLVX-Alb-TetOne
        2.1.2 构建载体pLATTTG
        2.1.3 载体pLATTPUTG构建
    2.2 pLATTPUTG瞬时转染293T细胞
    2.3 瞬时转染pLATTPUTG的细胞中puPA、CopGFP和标签蛋白Flag表达
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]构建Alb启动子调控HBEGF肝特异性表达的慢病毒载体及其功能验证[J]. 贾俊双,陈傍柱,林霞,刘宇,肖东,林晓琳.  岭南现代临床外科. 2016(03)
[2]用于肝脏疾病研究的人源化小鼠模型概述[J]. 任晓楠,周晓辉.  中国实验动物学报. 2014(05)
[3]借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞[J]. 张晟,肖高芳,黄黎珍,那顺巴雅尔,贾俊双,姚志芳,肖东,顾为望.  中国比较医学杂志. 2010(04)
[4]Tetracycline-inducible Expression Systems: New Strategies and Practices in the Transgenic Mouse Modeling[J]. Yan SUN~(1,2) Xigu CHEN~1* Dong XIAO~2*1 Center of Experimental Animals,Sun Yar.Sen University,Guangzhou 510080,China;2 Institute of Comparative Medicine and Center of Experimental Animals,Southern Medical University Guangzhou 510515,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(04)
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本文编号：3589952