视蛋白基因启动子—绿色荧光蛋白转基因小鼠的建立

发布时间：2022-01-15 22:39

　　视网膜是视神经系统中的一个重要的组成部分，视网膜和中枢神经系统都来源于神经管，因此视网膜的许多发育特征可以反映出脑发育的一些重要特点，研究视网膜发育是研究脑发育的一个重要窗口。视网膜病变也是致盲的一个重要原因，是影响人类健康的危害之一，如由视网膜光感受细胞内的基因突变造成的遗传性视网膜色素变性等。研究视网膜发育和功能特性，特别是光感受细胞的特性，将为这些疾病的研究和进一步治疗奠定基础。深入这一领域的研究，动物模型是直接和有效的，最常用的就是转基因小鼠。小鼠与人在基因组结构和基因功能方面有极强的相似性，同时繁殖快、饲养费用较低，因此转基因小鼠成为目前体内实验研究体系的最优选的方法。本实验的目的旨在制作出视网膜的视感受细胞有效表达绿色荧光蛋白的转基因小鼠，用来标记视网膜，研究视网膜发育和用作视网膜移植实验等实验体系。我们从基因组中扩增出视蛋白基因5’端上游2.1kb的调控序列片段，该序列能够特异而有效的调控目的基因在视网膜中表达。进而将这一调控区与含有绿色荧光蛋白cDNA的真核表达载体pEGFP-C1进行重组，获得了调控绿色荧光蛋白在视网膜内表达的真核表达载体，命名为ROP-GFP。将RO... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PeR结果

.PeR结果。M示Marker图3.PeR产物回收后的结果同)目的基因的连接:连接后共有16处白斑，分别接种节青霉素(1pl/ml)的LB培养基中扩增，分别编号。但第1号菌扩增失败。将2一16号菌回收质粒，编粒。连接后形成的中间质粒命为ROP一T。酶切鉴定结果:5、6、10号质粒EcoRI单酶切后结期相符(如图4)。对可能连接正确的5、6、10号质酶切，酶切后所得片段大小也都与预期相符(图5和

ZO27bP图2.PeR结果。M示Marker图3.PeR产物回收后的结果(后同)(三)目的基因的连接:连接后共有16处白斑，分别接种于sml加有氨节青霉素(1pl/ml)的LB培养基中扩增，分别编号为1一16号菌。但第1号菌扩增失败。将2一16号菌回收质粒，编号2一16号质粒。连接后形成的中间质粒命为ROP一T。(四)酶切鉴定结果:5、6、10号质粒EcoRI单酶切后结果大小与预期相符(如图4)。对可能连接正确的5、6、10号质粒作进一步酶切，酶切后所得片段大小也都与预期相符(图5和图6)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]视网膜色素变性分子遗传学研究现状[J]. 熊世红,赵堪兴,王立.  国外医学.眼科学分册. 2000(02)



本文编号：3591445