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抗人GPA/GPB单链抗体的获得及其与链霉亲和素的融合表达

发布时间:2022-01-16 03:36
  人类继发现红细胞血型之后,至20世纪末,已发现29个血型系统,600多种抗原决定簇。血型糖蛋白A(GPA)和血型糖蛋白B(GPB)是人红细胞膜蛋白的主要成分,也是红细胞分化的重要分子标志。它们共同构成了红细胞膜上MNSs血型系统。GPA和GPB基因均位于第4号染色体上,其基因结构同源性达60%,本研究通过红细胞免疫,获得4株抗M单抗、1株抗N单抗及3株重要的抗GPA/GPB单抗,为今后MNSs血型系统的研究、鉴定及利用其制备自身红细胞凝集实验中的双功能抗体打下了的基础。同时本研究还通过RT-PCR的方法,从以上获得的抗GPA/GPB的单抗中成功扩增出其重链及轻链的可变区,通过短肽连接获得了相应的单链抗体,该抗体能与所有类型的红细胞结合。在此单链抗体的基础上,本研究还利用了重组DNA技术将链霉亲和素与之进行原核表达,所获得的融合蛋白一方面能与红细胞结合,另一方面能与链霉亲和素结合,再在生物素标记的抗体的存在下,可以介导产生肉眼可见的红细胞凝集反应。通过血凝反应来判定特异性抗体或抗原的阳性或阴性。最终获得的单链抗体与链霉亲和素的融合蛋白,作为双功能抗体起到中间桥梁作用,将自身红细胞凝集反应... 

【文章来源】:扬州大学江苏省

【文章页数】:53 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

抗人GPA/GPB单链抗体的获得及其与链霉亲和素的融合表达


自身红细胞凝集反应示意图

示意图,单链抗体,抗体,示意图


分子中两个 V 区(VH/VL 或 VH/VK)共同特异性。总的说来,接合在一起的两个 V 区位点[25],虽然有单个 V 区能接合抗体的例子抗原间的特异性紧密结合能力显著提高。体的某些优点在另一方面也可能是缺点。如与双价抗体比较,它们与靶细胞表面抗原的于只有抗体的 V 区,免疫原性要比原来的 M整抗体的半寿周期短,很快从血液中清除,,实验证明,完整的抗体基因虽然能表达成折叠,装配和糖基化成有活性的抗体分子[26]体的某些缺点是可以克服的。如在嵌合抗体菌中能够正确地装配 Fab 和 Fv 片段,并保留图 2 抗体及单链抗体示意图

转印,电泳分离,融合蛋白,抗体


-PAGE 电泳分离后将蛋白转印到 PVDF 膜上,入 myc 标准抗体作为一抗,以 HRP 标记的羊曝光结果如下(图 2.7):检测2 332kd图2.7 ScFv 融合蛋白WesteFig2.7 Western blot analysis1. pBAD/gIIIA- ScFv supe2. pBAD/gIIIA- ScFv bact3. pBAD/gIIIA blank bact1 2 3 4

【参考文献】:
期刊论文
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[2]抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达[J]. 操敏,唐家琪,李光富,王长军,潘秀珍,李先富.  南京师大学报(自然科学版). 2000(02)
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[4]免疫遗传学分子基础及在输血等领域的应用[J]. 赵桐茂.  中国输血杂志. 1996(03)
[5]生物素─链霉亲和素系统在放射免疫显像中的应用[J]. 孙建中,朱承谟.  上海免疫学杂志. 1994(04)



本文编号:3591857

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