miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用
发布时间：2022-01-16 05:23
利用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）的方法分析了强毒株人型结核分枝杆菌H37Rv和减毒株卡介苗（BCG）感染肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）株A549中微小RNA-146a （miR-146a）的表达情况;构建miR-146a腺病毒过表达载体,分析在结核分枝杆菌（Mtb）感染A549细胞中,过表达miR-146a对toll样受体（TLRs）信号通路及炎症因子的表达调控作用.结果表明, Mtb感染可引起A549细胞中miR-146a表达上调;当在A549细胞中过表达miR-146a时,在BCG感染组中TLR2的表达表现为感染后显著抑制, H37Rv感染组中TLR2表达差异不显著; TLR4在BCG和H37Rv感染组中均表现为显著下调.过表达miR-146a时,在BCG和H37Rv感染组中对TLR信号通路的下游分子髓样分化因子（MyD88）、TNF受体关联因子6 （TRAF6）、核因子κB （NF-κB）和促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6的表达均表现为感染后的抑制作用,而IL-8表达影响不明显.说明在AECⅡ细胞抗Mtb感染过程中, miR-146a负调...
【文章来源】：兰州大学学报(自然科学版). 2019,55(02)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
小鼠U6启动子miR-146a的扩增
2.2.2过表达miR-146a腺病毒的验证利用过表达miR-146a腺病毒分别感染293T和A549,提取细胞总RNA,用miR-146a特异性颈环引物进行反转录,使用miR-146a特异性引物进行qPCR,检测miR-146a的表达量.实验结果表明,过表达miR-146a腺病毒感染293T和A549时,空白腺病毒中细胞表达水平为0.35和0.04,miR-146aM:标记物;1、2泳道:模板稀释100倍;3、4泳道:模板稀释10倍;5、6泳道:模板图1小鼠U6启动子miR-146a的扩增Fig.1AmplificationofmouseU6promotermiR-146aM:标记物;1~10泳道:10个转化Blunt-U6-miR-146a单克隆的PCR图2pEASY-Blunt-U6-miR-146a连接产物的PCR鉴定Fig.2PCRidentificationofpEASY-Blunt-U6-miR-146aligationproduct图3pEASY-Blunt-U6-miR-146a片段测序结果Fig.3SequencingresultsofpEASY-Blunt-U6-miR-146afragmentM:标记物;1~7泳道:7个转化穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a单克隆载体的SpeⅠ和XhoⅠ双酶切图4穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a的双酶切鉴定Fig.4IdentificationofshuttlevectorpacAd5K-NpA-U6-miR-146abydoubleenzymedigestion1、3、5、7、9泳道:5个转化单克隆腺病毒骨架载体Ad-E3-RSV-GFP;2、4、6、8、10泳道:其PacⅠ单酶切鉴定图5骨架载体Ad-E3-RSV-GFP的单酶切鉴定Fig.5SingledigestionidentificationofskeletonvectorAd-E3-RSV-GFP程龙，等：miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用223
2.2.2过表达miR-146a腺病毒的验证利用过表达miR-146a腺病毒分别感染293T和A549,提取细胞总RNA,用miR-146a特异性颈环引物进行反转录,使用miR-146a特异性引物进行qPCR,检测miR-146a的表达量.实验结果表明,过表达miR-146a腺病毒感染293T和A549时,空白腺病毒中细胞表达水平为0.35和0.04,miR-146aM:标记物;1、2泳道:模板稀释100倍;3、4泳道:模板稀释10倍;5、6泳道:模板图1小鼠U6启动子miR-146a的扩增Fig.1AmplificationofmouseU6promotermiR-146aM:标记物;1~10泳道:10个转化Blunt-U6-miR-146a单克隆的PCR图2pEASY-Blunt-U6-miR-146a连接产物的PCR鉴定Fig.2PCRidentificationofpEASY-Blunt-U6-miR-146aligationproduct图3pEASY-Blunt-U6-miR-146a片段测序结果Fig.3SequencingresultsofpEASY-Blunt-U6-miR-146afragmentM:标记物;1~7泳道:7个转化穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a单克隆载体的SpeⅠ和XhoⅠ双酶切图4穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a的双酶切鉴定Fig.4IdentificationofshuttlevectorpacAd5K-NpA-U6-miR-146abydoubleenzymedigestion1、3、5、7、9泳道:5个转化单克隆腺病毒骨架载体Ad-E3-RSV-GFP;2、4、6、8、10泳道:其PacⅠ单酶切鉴定图5骨架载体Ad-E3-RSV-GFP的单酶切鉴定Fig.5SingledigestionidentificationofskeletonvectorAd-E3-RSV-GFP程龙，等：miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用223
【参考文献】：
期刊论文
[1]兰州市大气污染对人体呼吸系统疾病的影响[J]. 田瑜,王金艳,李旭,魏林波,李艳,冯凯悦. 兰州大学学报(自然科学版). 2017(03)
[2]β-咔啉-3-羧酸酯二聚体的合成及体外抗肿瘤活性研究[J]. 秦文娟,谷红玲,马瑞月,杜宏涛,王俊儒. 兰州大学学报(自然科学版). 2016(06)
[3]疫苗有效性具有阶段性特征的传染病模型的全局稳定性[J]. 宋修朝,李建全,尹忠海,李炳杰. 兰州大学学报(自然科学版). 2016(03)
[4]miRNA-140过表达腺病毒载体的构建及鉴定[J]. 贺鹏,段莉. 东南大学学报(医学版). 2016(01)
[5]腺病毒介导miRNA-29a过表达抑制人胃癌细胞的增殖[J]. 刘志鹏,王宗华,卢斌,胡春燕,李学成,邹利全,张方征,陈陵. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(03)
本文编号：3592020
【文章来源】：兰州大学学报(自然科学版). 2019,55(02)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
小鼠U6启动子miR-146a的扩增
2.2.2过表达miR-146a腺病毒的验证利用过表达miR-146a腺病毒分别感染293T和A549,提取细胞总RNA,用miR-146a特异性颈环引物进行反转录,使用miR-146a特异性引物进行qPCR,检测miR-146a的表达量.实验结果表明,过表达miR-146a腺病毒感染293T和A549时,空白腺病毒中细胞表达水平为0.35和0.04,miR-146aM:标记物;1、2泳道:模板稀释100倍;3、4泳道:模板稀释10倍;5、6泳道:模板图1小鼠U6启动子miR-146a的扩增Fig.1AmplificationofmouseU6promotermiR-146aM:标记物;1~10泳道:10个转化Blunt-U6-miR-146a单克隆的PCR图2pEASY-Blunt-U6-miR-146a连接产物的PCR鉴定Fig.2PCRidentificationofpEASY-Blunt-U6-miR-146aligationproduct图3pEASY-Blunt-U6-miR-146a片段测序结果Fig.3SequencingresultsofpEASY-Blunt-U6-miR-146afragmentM:标记物;1~7泳道:7个转化穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a单克隆载体的SpeⅠ和XhoⅠ双酶切图4穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a的双酶切鉴定Fig.4IdentificationofshuttlevectorpacAd5K-NpA-U6-miR-146abydoubleenzymedigestion1、3、5、7、9泳道:5个转化单克隆腺病毒骨架载体Ad-E3-RSV-GFP;2、4、6、8、10泳道:其PacⅠ单酶切鉴定图5骨架载体Ad-E3-RSV-GFP的单酶切鉴定Fig.5SingledigestionidentificationofskeletonvectorAd-E3-RSV-GFP程龙，等：miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用223
2.2.2过表达miR-146a腺病毒的验证利用过表达miR-146a腺病毒分别感染293T和A549,提取细胞总RNA,用miR-146a特异性颈环引物进行反转录,使用miR-146a特异性引物进行qPCR,检测miR-146a的表达量.实验结果表明,过表达miR-146a腺病毒感染293T和A549时,空白腺病毒中细胞表达水平为0.35和0.04,miR-146aM:标记物;1、2泳道:模板稀释100倍;3、4泳道:模板稀释10倍;5、6泳道:模板图1小鼠U6启动子miR-146a的扩增Fig.1AmplificationofmouseU6promotermiR-146aM:标记物;1~10泳道:10个转化Blunt-U6-miR-146a单克隆的PCR图2pEASY-Blunt-U6-miR-146a连接产物的PCR鉴定Fig.2PCRidentificationofpEASY-Blunt-U6-miR-146aligationproduct图3pEASY-Blunt-U6-miR-146a片段测序结果Fig.3SequencingresultsofpEASY-Blunt-U6-miR-146afragmentM:标记物;1~7泳道:7个转化穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a单克隆载体的SpeⅠ和XhoⅠ双酶切图4穿梭载体pacAd5K-NpA-U6-miR-146a的双酶切鉴定Fig.4IdentificationofshuttlevectorpacAd5K-NpA-U6-miR-146abydoubleenzymedigestion1、3、5、7、9泳道:5个转化单克隆腺病毒骨架载体Ad-E3-RSV-GFP;2、4、6、8、10泳道:其PacⅠ单酶切鉴定图5骨架载体Ad-E3-RSV-GFP的单酶切鉴定Fig.5SingledigestionidentificationofskeletonvectorAd-E3-RSV-GFP程龙，等：miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用223
【参考文献】：
期刊论文
[1]兰州市大气污染对人体呼吸系统疾病的影响[J]. 田瑜,王金艳,李旭,魏林波,李艳,冯凯悦. 兰州大学学报(自然科学版). 2017(03)
[2]β-咔啉-3-羧酸酯二聚体的合成及体外抗肿瘤活性研究[J]. 秦文娟,谷红玲,马瑞月,杜宏涛,王俊儒. 兰州大学学报(自然科学版). 2016(06)
[3]疫苗有效性具有阶段性特征的传染病模型的全局稳定性[J]. 宋修朝,李建全,尹忠海,李炳杰. 兰州大学学报(自然科学版). 2016(03)
[4]miRNA-140过表达腺病毒载体的构建及鉴定[J]. 贺鹏,段莉. 东南大学学报(医学版). 2016(01)
[5]腺病毒介导miRNA-29a过表达抑制人胃癌细胞的增殖[J]. 刘志鹏,王宗华,卢斌,胡春燕,李学成,邹利全,张方征,陈陵. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(03)
本文编号：3592020
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/binglixuelunwen/3592020.html
最近更新
教材专著
