基于酵母双杂交技术的PRR11相互作用蛋白筛选与初步分析

发布时间：2022-01-20 09:07

　　目的:采用酵母双杂交技术,筛选PRR11的相互作用蛋白,为深入研究其分子行为机制奠定基础。方法:构建用于酵母双杂交筛选的PRR11诱饵质粒并检测其自激活作用,根据结果进一步构建突变体获得具有较低自激活作用的突变体。对人胎脑cDNA文库进行筛选,获得初始阳性克隆。通过LacZ报告基因检测、回转验证、阳性克隆测序及BLAST序列比对分析,排除假阳性克隆和重复克隆,确定PRR11的候选相互作用蛋白。结果:PRR11具有自激活作用,构建了一个较低自激活作用的PRR11突变体。通过酵母双杂交筛选,获得102个初始阳性克隆转化子。经LacZ报告基因检测,将阳性克隆锁定至39个。通过测序和序列比对分析,证实这39个克隆属于编码15种不同蛋白的基因。最终有RNF41等4个蛋白通过回转验证。结论:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潜在相互作用蛋白。 

【文章来源】：重庆医科大学学报. 2019,44(06)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 诱饵载体的构建和鉴定
        1.2.2 PRR11及其突变体自激活检测
        1.2.3 筛选文库用3-AT浓度确定
        1.2.4 酵母双杂交文库筛选
        1.2.5阳性克隆鉴定
        1.2.6 酵母阳性克隆DNA提取和测序比对
        1.2.7 阳性克隆回转验证
2 结果
    2.1 诱饵载体的构建
    2.2 重组诱饵蛋白自激活检测和功能检测
    2.3 PRR11突变体构建及自激活检测
    2.4 文库筛选和阳性克隆鉴定
3 讨论



本文编号：3598553