人基因组随机MARs的分离、克隆及其功能的初步研究

发布时间：2022-01-21 06:55

　　背景与目的 随着人类基因组序列草图的完成,基因组学研究的广泛开展,基因表达调控研究已经逐渐从单个基因点、线式的调控拓展到立体层面上多基因、基因簇以至整个基因组的调控网络。在遗传调控过程中,反式作用因子与顺式作用元件间的相互作用是构成基因表达调控网络的基础。 核基质附着区（Matrix attachment regions,MARs）是真核生物染色质中可以与核基质（Nuclear matrix,NM）蛋白结合的一段DNA序列。它能使染色质形成环状结构,并与真核基因组中其它调控元件以及反式作用因子一起调节DNA复制、RNA合成和hnRNA加工等过程,在基因表达调控中起重要作用。此外,在基因工程研究中,引入MAR能消除外源基因对整合位点的敏感性,从而消除插入位点周围调控元件的影响,提高转染细胞外源基因表达的效率和稳定性,为克服转基因沉默或基因治疗提供新的途径。目前S/MARtDB库中,人源的MARs仅有117个,其功能尚未全知,而人类基因组中大量的MARs有待深入研究。因此,本研究拟从人基因组中分离随机的MARs元件,构建成随机MARs库;利用体外结合实验筛选出具有MARs特性的... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人PUC19一MAR的构建策略Figure1TheeonstiuctionsrtategyofPUC19.M人RPlasmid2.MAR冶的平端化和纯化

2.MAF污的分离上述分离获得的细胞核经DNasel、高盐(4m。比NaCI)及蛋白酶消化处理后，分离、抽提出大量的随机MARS片段，经1.2%琼脂糖凝胶电泳，结果如图2所示:随机MA]七片段大小不均一，在10b0p一巧kb之间，呈弥散分布。

琼脂糖凝胶电泳结果(见图4)显示:平端化后MARS同填平前的片段M川七一样，大小不均一，在10b0p一15kb之间，呈弥散分布。l:入DNAE/eoRI+Hind111Marker;2:filledMARs图4平端化后MARS琼脂糖凝胶电泳Figure4ElectroPhoesrisoffilledMARSby铭arosegel三、MAP凶的克隆与鉴定1.MARs的克隆应用p一半乳糖昔酶选择系统筛选出阳性克隆重组子，共获得238个白色单克隆，即构成含238个克隆的随机MARs库。2.MARs克隆的鉴定从含有238个单克隆的MARs库中，随机挑取的18个MARs单克隆(JMr/A一J和JM回a.h)培养过夜菌，抽提其质粒，并经限制性内切酶EocR卜Hindm酶切后，琼脂糖凝胶电泳，结果见图5、图6。从图中可以看出

【参考文献】：
期刊论文
[1]人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析[J]. 毛琼国,白云,张波,黄钢,王燕,代佳平.  第三军医大学学报. 2004(15)
[2]6个植物MARs序列的ARS功能鉴定与分析[J]. 李宏,杨予涛,张可伟,郑成超.  科学通报. 2003(24)



本文编号：3599783