真核表达MERS-CoV刺突蛋白亚单位的信号肽序列优化研究

发布时间：2022-01-24 03:18

　　中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）的刺突蛋白（Spike,S）亚单位1（S1）是引起宿主免疫反应和产生中和抗体的主要靶抗原,也是疫苗研发和病原检测的重要靶标,选用适宜的真核表达系统高效表达S1蛋白是进行相关研究的基础。为确定MERS-CoV S1在哺乳动物细胞中高效分泌性表达的信号肽序列,构建了含高斯荧光素酶（Gaussia luciferase,GLuc）、人组织纤溶酶原激活剂（Tissue plasminogen activator,tPA）及小鼠免疫球蛋白G的2a亚型（Mouse immunoglobular G subtype 2a,MIgG2a）7个信号肽（原始序列和改造序列）序列的MERS-CoV S1表达质粒,瞬时转染细胞后,通过Western Blot检测并比较细胞培养上清和裂解液中S1的表达水平及分泌表达效率（条带密度灰度扫描比）,并对哺乳动物细胞表达的S1蛋白的纯度与抗原特性进行了分析。结果表明7种信号肽在293T、BHK21和ExpiCHO-S^TM

【文章来源】：病毒学报. 2019,35(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

pLQ-uni-51表达质粒示意图和信号肚序列

pressionefficiencyofMERS‐CoVS1inExpiCHO‐STMwithGLuc‐2，tPA‐1，tPA‐2SPsNotes：A.TheexpressionofMERS‐CoVS1inculturesupernatant（S）andcelllysate（L）ofExpiCHO‐STMdetectedbyWesternBlot；B.TherelativeexpressionlevelofMERS‐CoVS1insupernatant（S/β‐actin）ofExpiCHO‐STM；C.Thesecretoryexpressionefficiency（S/L）ofMERS‐CoVS1inExpiCHO‐STM.1：Vectorcontrol；2：GLuc‐2；3：tPA‐1；4：tPA‐2图5ExpiCHOSTM中大量表达MERSCoVS1经纯化后的纯度和抗原性分析注：A：a：SDS‐PAGE；b：WesternBlot分析MERS‐CoVS1抗原特异性；B：ELISA分析MERS‐CoVS1抗原特异性Figure5AnalysisofpurityandantigenicityofpurifiedMERS‐CoVS1fromExpiCHO‐STMNotes：A.a：SDS‐PAGE；b：AntigenicityanalysisofMERS‐CoVS1byWesternBlot；B：AntigenicityanalysisofMERS‐CoVS1byELISA··24


本文编号：3605737