全血基因组DNA的快速提取及其应用

发布时间：2022-01-24 08:52

　　目的：建立简便、快速、可靠的分离纯化全血中基因组DNA的方法，以便能在普通的临床实验室使用和推广。 方法：采用不完全溶血剂STMT处理全血样品，异硫氰酸胍裂解白细胞核，硅胶特异性吸附释放出来的DNA，漂洗液洗去硅胶上非DNA成分，最后用TE把DNA从硅胶上洗脱下来。对所建立的方法的实验条件包括异硫氰酸胍（GuSCN）浓度、结合液pH值、结合温度等进行优化，从而得到高质量的DNA溶液，建立异硫氰酸胍-硅胶法。并对所建立的方法通过以下几方面进行评价，包括DNA的产量、DNA的纯度、DNA的完整性、RNA的污染、重复性，以及将纯化产物应用于PCR反应和限制性内切酶消化，并与传统的SDS-蛋白酶K/苯酚-氯仿（简称酚-仿）法进行比较。 结果： 1、异硫氰酸胍（GuSCN）浓度、结合液pH值和结合温度等影响异硫氰酸胍-硅胶法的提取效率。其最佳条件是GuSCN浓度为4M、结合液pH值为6.5、结合温度为37℃。 2、异硫氰酸胍-硅胶法提取DNA平均含量（3.7μg/100μl全血）高于酚-仿法（2.99μg/100μl全血）（p＜0.05），纯度（OD260/OD280 1... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

基因组DNA电泳结果

同时同条件对异硫氰肌酸一硅胶法和酚一仿法制备的DNA的第巧号染色体的CSK基因外显子I进行扩增，引物设计扩增片段为287bp，经聚丙烯酞胺凝胶电泳后与标准分子量比较，该片段与预计片段的大小一致(见图3一9)。蝴黝助彻4O0铆划心图3一9两种方法提取DNA的PCR结果1一4:异硫氰酸肌一硅胶法提取DNA的PCR结果5一8:酚一仿法提取DNA的PCR结果M:100bPladder

【参考文献】：
期刊论文
[1]一种碘化钾提取外周血基因组DNA的方法[J]. 赵书平,张俊洁,尤建,杨玉红,郭峰.  中华医学遗传学杂志. 1999(06)
[2]盐析法快速抽提外周血DNA方法的改进[J]. 刘华欣,王承志,潘自铁,王晓玉,姚敏捷.  空军医高专学报. 1999(01)
[3]快速盐析法提取DNA在HLA基因分型中的应用[J]. 谭建明,谢桐,徐琴君,徐达,王祥慧,丁言德.  中华器官移植杂志. 1996(01)
[4]介绍一种简便快速的可供临床实验室使用的DNA提取、纯化方法[J]. 秦秋平.  生命的化学(中国生物化学会通讯). 1991(03)



本文编号：3606281