pcDNA3.1（一）/hTGF β 3 及其转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统的构建与生长增殖活性研究

发布时间：2022-01-27 08:02

　　目的 构建人转化生长因子β₃的真核表达载体pcDNA3.1（一）/TGFβ₃,以及该重组质粒转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,检测TGFβ₃基因在成纤维细胞中的表达和该系统细胞的生长增殖性状。方法 利用重组DNA技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定真核表达载体pcDNA3.1（一）/TGFβ₃。通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将所构建的重组质粒导入NIH3T3成纤维细胞,构建TGFβ₃转基因NIH3T3成纤维细胞系,应用RT-PCR检测hTGFβ₃在真核细胞中的表达。经四唑蓝比色实 验法（MTT）分别对hTGFβ₃重组质粒稳定表达细胞组、空载体组和NIH3T3对照组进行检测。结果 经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,酶切片段与GenBank中登记的TFGFβ₃全长序列相同,pcDNA3.1（一）/TGFβ₃酶切片段的长度与理论大小相符。在10株转染和经G418反复筛选的NIH3T3... 

【文章来源】：汕头大学广东省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

酶切分析图

汕头大学医学院硕士研究生毕业论文:随机选择10个经反复筛选典型的转染细胞集分析与鉴定。结果显示，在10株转染pDcNA3.1G7株细胞的电泳结果可见一条明显约267bp条的约26b7p条带或无(图6)，而非转染组和载体，550bp的p一actni条带明显。说明转基因hT成功。

图5R--TCPR扩增转染细胞TGFp3基因电泳结果转染peDNA3.z卜)一兀Fp3重组质粒细胞系3非转RPorduestwithPrimesrorfmhTGFp3oftransfeetedIH3T3fiborblasstrtansefetedwithpeDNA3.1(一)一TGFpetd

【参考文献】：
期刊论文
[1]增生性瘢痕转化生长因子β及其受体的分布及表达[J]. 吕洛,陈玉林,章庆国.  中华烧伤杂志. 2004(01)
[2]转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1（+）/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达[J]. 王卫国,娄思权,郑多,夏家辉.  中国现代医学杂志. 2003(07)
[3]TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用[J]. 唐世杰,胡素銮,王玉银.  汕头大学医学院学报. 2002(04)
[4]成纤维细胞与创伤修复的生物学过程[J]. 杨力,郭树忠.  中国临床康复. 2002(04)
[5]基因治疗在伤口愈合中的应用[J]. 贾赤宇,陈璧.  中华外科杂志. 2002(01)
[6]hTGFβ1基因转染对NIH3T3成纤维细胞增殖的影响[J]. 贾赤宇,陈璧.  中华烧伤杂志. 2000(06)
[7]成纤维细胞与创伤修复的研究进展[J]. 王益民,韦福康,刘敏.  中国修复重建外科杂志. 2000(02)



本文编号：3612099