表达鼠疫菌F1抗原的重组芽孢的制备及口服免疫效果观察

发布时间：2022-04-23 21:20

　　目的利用枯草杆菌芽孢展示外源蛋白的呈递技术,研究表面展示鼠疫菌保守抗原F1蛋白的重组芽孢,分析评价重组芽孢的免疫原性。方法将枯草杆菌CotB基因构建到pDG1664质粒,再将鼠疫菌保守序列F1蛋白编码基因连接到CotB基因的下游,构建成重组质粒。然后将外源基因CotB-F1同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中。经PCR、Western Blot方法鉴定重组芽孢中鼠疫F1蛋白的表达。用上述重组芽孢以无佐剂口服方式免疫小鼠。采用ELISA方法检测重组芽孢免疫小鼠的免疫效果。结果本研究制备出表面表达CotB-F1融合蛋白的重组枯草杆菌芽孢。用重组芽孢和野生型芽孢口服免疫BALB/c小鼠。实验结果表明,重组芽孢免疫组产生了针对鼠疫F1抗原的特异性抗体。重组芽孢免疫小鼠能产生有效的免疫应答。结论本研究制备出表面展示鼠疫F1蛋白的枯草杆菌芽孢,建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法,为发展口服鼠疫疫苗奠定了基础。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 重组质粒pDG1664-CotB质粒的构建
    1.3 目的基因F1片段的扩增及纯化
    1.4 重组枯草杆菌RCotB-F1的构建
    1.5 重组枯草杆菌芽孢的制备及形态学鉴定
    1.6 重组芽孢16S rRNA基因序列测定
    1.7 SDS-PAGE及Western blot鉴定重组菌株表面表达蛋白
    1.8 免疫荧光及流式方法鉴定重组菌
    1.9 ELISA检测血清抗体水平
2 结 果
    2.1 重组菌株RCotB-F1的构建
    2.2 重组枯草杆菌芽孢的制备及形态学鉴定
    2.3 重组芽孢16S rRNA基因序列测定
    2.4 Western Blot鉴定重组菌株表面表达蛋白
    2.5 免疫荧光及流式方法鉴定重组枯草杆菌芽孢
    2.6 ELISA检测血清抗体水平
3 讨 论



本文编号：3648007