肺炎克雷伯菌KP1＿4563基因突变株的构建及其生物膜表型分析

发布时间：2022-05-12 17:40

　　KP1₄563基因是肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中假设的蛋白编码基因,与Ⅲ型菌毛的功能有关。本实验首先采用同源重组基因敲除方法构建肺炎克雷伯菌KP1₄563基因缺失的突变株（Kp-△4563）,然后PCR扩增KP1₄563基因片段,克隆到质粒p BAD33上,将重组质粒导入Kp-△4563获得回补株（Kpc-△4563）。分别测定野生株、突变株、回补株用普通LB培养基,改良Minka培养基以及含胆汁盐的LB培养基培养时生物膜形成能力,以此来探讨KP1₄563基因以及不同培养基对肺炎克雷伯菌体外生物膜形成的影响。我们成功构建KP1₄563基因缺失的突变株和回补株Kpc-△4563。与野生株相比,突变株Kp-△4563生物膜形成能力减弱,回补株介于野生株和突变株之间。使用改良Minka培养基使菌株菌毛化以及加入胆汁盐可以增加生物膜的形成能力。这些分析表明肺炎克雷伯菌KP1₄563基因能正调控细菌生物膜的形成。体外培养使细菌菌毛化以及加入胆汁盐可以促进生物膜... 

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【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 突变株的构建
    1.2 回补株的构建
    1.3 生物膜表型分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和质粒
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要培养基
    3.2 试验方法
        3.2.1 构建突变株Kp-△4563
        3.2.2 构建回补株Kpc-△4563
        3.2.3 生物膜表型实验
作者贡献


【参考文献】：
期刊论文
[1]肺炎克雷伯菌生物膜形成机制的研究进展[J]. 徐丽,李蓓.  中国病原生物学杂志. 2016(11)
[2]ZFNs、TALENs和CRISPR-Cas基因组靶向编辑技术及其在植物中的应用[J]. 廖鹏飞,聂旺,余雅心,童普国,李绍波,朱友林.  基因组学与应用生物学. 2016(02)
[3]肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立[J]. 高钰双,冯甜,邱景富,杨瑞馥,周冬生,李迎丽.  军事医学. 2013(06)
[4]鸡源肺炎克雷伯菌菌毛的分型[J]. 何礼洋,韩文瑜,贾艳,雷连成,杨洋.  中国生物制品学杂志. 2007(08)
[5]外源载体高效转化肺炎克雷伯菌的新途径[J]. 郑艳,刘喜朋,刘建华.  微生物学报. 2007(04)



本文编号：3652718