刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1与4诱导小鼠免疫保护性的比较研究

发布时间：2022-07-03 17:53

　　目的比较刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1 （rSAG1）与rSAG4单独及联合诱导昆明小鼠的免疫保护性作用,为研制复合型疫苗分子提供参考。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板, PCR扩增SAG1和SAG4,构建重组质粒pET-28a （+）-SAG1和pET-28a （+）-SAG4;经双酶切和测序鉴定后,将序列正确的重组质粒转入BL21 （DE3）中,挑选阳性菌落,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,收集菌体,超声裂菌。在变性条件下经镍离子亲合层析柱纯化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素浓度的方法进行目的蛋白复性; 125只昆明小鼠按照随机数字表法分为5组,每组25只,分别为r SAG1免疫组、 rSAG4免疫组、 rSAG1+rSAG4联合免疫组、PBS对照组、 PBS+佐剂对照组,首次免疫为重组蛋白100μg/鼠,与等体积完全弗氏佐剂充分乳化后进行皮下多点注射,间隔2周加强免疫1次,连续2次,加强免疫时重组蛋白为50μg/鼠,与等体积弗氏不完全佐剂乳化,对照组小鼠注射等量PBS。各组小鼠于免疫前（0周）及首次免疫后第2、 4、 6周断尾取血,分离血清,间接ELISA法检测... 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 虫株、质粒、菌株和实验动物来源
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 目的基因扩增
    1.4 pET-28a (+) -SAG1和pET-28a (+) -SAG4表达质粒的构建
    1.5 rSAG1、rSAG4的表达纯化
    1.6 rSAG1、rSAG4免疫小鼠
    1.7 ELISA测定小鼠血清IgG抗体
    1.8 攻击感染实验
    1.9 统计学分析
    1.1 0 伦理批准和患者知情同意
2 结果
    2.1 弓形虫SAG1与SAG4基因的克隆、表达与纯化
    2.2 ELISA检测结果
    2.3 攻击感染后生存时间比较
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[2]刚地弓形虫表面抗原1、2 B细胞表位基因的融合表达和鉴定[J]. 王钊哲,许瑞,洪炀,林矫矫,陆珂,李浩,陈兆国,石耀军,吴思敏,江嘉欣,李嘉静,朱传刚.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2017(06)
[3]《弓形虫病的诊断》标准解读[J]. 严晓岚,闻礼永,官亚宜,张剑锋,林丹丹.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2016(04)
[4]CD8+T细胞免疫应答在刚地弓形虫感染免疫中的功能研究进展[J]. 吴斌,吕芳丽.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2014(02)
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[6]弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆表达、纯化与鉴定[J]. 杨雯,田春林,朱穗京,刘晓泉.  广西医科大学学报. 2010(02)
[7]弓形虫表面抗原SAG4基因的克隆、表达和鉴定[J]. 杨雯,万孝玲,田春林,王卫群,刘晓泉.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2009(04)
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本文编号：3655369