副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的克

发布时间：2022-07-12 19:51

　　副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Vp）为一种嗜盐性弧菌，能导致人类食物中毒和旅游者腹泻，还能导致反应性关节炎、心脏疾病等。而临床上检测到的致病茵大多具有溶血现象（亦称神奈川现象），基因水平研究发现该类病原体都携带tdh基因，编码TDH。本研究应用基因工程技术克隆了tdh基因，并让其在原核表达载体pTrc99A上、经IPTG诱导得到高效表达，获得重组抗原，制备抗-TDH抗体；突变了TDH的Trp65→Ala65，期望构建出针对TDH的基因工程疫苗候选株。 设计一对引物，采用PCR技术扩增tdh基因，用限制性内切酶消化tdh、pUC19和pTrc99A，连接并转化宿主菌JM109，筛选并鉴定出重组质粒tdh/pUC19，由军事医学科学院完成序列测定。再亚克隆至pTrc99A上，构建出重组质粒tdh/pTrc99A。发酵重组菌tdh/pTrc99A/JM109，条件优化后，tdh基因在pTrc99A上，经IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表明tdh基因得到高效、可溶、非融合性表达；溶血试验证明该表达产物具有溶血活性。表达产物经超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀、... 

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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引言
第一部分 副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的克隆研究
    1. 实验材料
    2. 实验方法
    3. 实验结果
    4. 分析与讨论
    5. 小结
第二部分 副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的突变研究
    1. 实验材料
    2. 实验方法
    3. 实验结果
    4. 分析与讨论
    5. 小结
结论
参考文献
致谢
文献综述
附件
    1. 重组质粒tdh/pUC19的正向序列
    2. 重组质粒tdh/pUC19的正向序列
    3. 重组质粒tdhm/pUC19的序列（Ⅰ）
    4. 重组质粒tdhm/pUC19的序列（Ⅱ）
    5. 攻读硕士期间已发表和修回的文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ抗原基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白的活性鉴定研究[J]. 方建民,余新炳,罗树红,王善青,蔡贤铮,潘波.  中国人兽共患病杂志. 1999(01)



本文编号：3659742