利用流式分选技术富集空载质粒转染特定巨噬细胞的方法及条件优化

发布时间：2022-08-02 11:51

　　目的:建立BD FACSAria II流式细胞分选仪富集PX458空载质粒转染J774A.1细胞的方法并进行技术优化,确立用于筛选J774A.1细胞的最佳条件。方法:构建PX458空载质粒转染J774A.1细胞株,进行7-AAD染色。选择BD FACSAria II流式细胞分选仪的100 μm喷嘴以及initial、4-way purity、purity、yield、fine tune、single cell 6种分选模式分选J774A.1细胞的GFP阳性转染株,比较仪器各部分参数变化对分选效率的影响。结果:在仪器稳定的液流条件下,100 μm喷嘴各分选模式所得细胞纯度均达80%以上,其中purity模式分选效率最高,达95.7%±1.0%。结论:使用BD FACSAria II流式细胞分选仪100 μm喷嘴分选PX458空载转染的J774A.1细胞选择purity分选模式最合适。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 脂质体转染:
        1.2.2 Western blot鉴定:
        1.2.3 细胞上机前处理及染色:
        1.2.4 流式细胞仪调试:
        1.2.5 流式细胞分选与分选效率检测:
        1.2.6细胞培养与冻存:
    1.3 统计学处理方法
2 结果
    2.1 细胞培养
    2.2 GFP蛋白表达鉴定
    2.3 主液流调试
    2.4 分选模式与分选纯度
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]应用流式细胞技术分选单核细胞亚群不同预富集方法的探讨[J]. 杨红艳,焉力方,王如刚,周欣.  现代检验医学杂志. 2018(01)
[2]第三代流式细胞分选仪及96孔板分选单个细胞的方法及参数优化[J]. 闵智慧,程韵枫.  中国临床医学. 2016(06)
[3]高端流式分选与免疫磁珠法纯化T细胞的比较[J]. 黄莹莹,尹盛夏,曹文强,李艳伟,王佳佳.  国际医药卫生导报. 2016 (22)
[4]流式细胞仪细胞分选参数调校方法的研究[J]. 周密,张全胜,包明柱.  医疗装备. 2016(07)
[5]FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群[J]. 刘锡娟,丁慧荣,田志华,韩海勃,张宏.  安徽医科大学学报. 2014(12)
[6]流式分选仪FACSAriaⅡ分选GFP阳性乳腺癌MCF-7细胞株的条件优化研究[J]. 郭陈智,史桂英.  上海交通大学学报(医学版). 2013(01)
[7]FACS Aria流式细胞分选仪质量控制体系的优化[J]. 张晖,周春保.  中国医疗器械杂志. 2009(03)
[8]FACS-Aria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定[J]. 曹云新,胡金涛,杨安钢.  第四军医大学学报. 2007(19)



本文编号：3668471