贴壁培养法鉴定海马神经干/祖细胞的增殖与分化能力

发布时间：2022-08-02 14:30

　　背景:神经干/祖细胞广泛应用于神经发育、神经相关性疾病和细胞移植等研究,体外分离培养的神经干/祖细胞能够为相关研究提供细胞模型。目的:探讨分离新生小鼠海马组织并高效培养出神经干/祖细胞的方法,并使用贴壁培养法对其增殖以及分化能力进行鉴定。方法:分离新生C57BL/6小鼠海马组织,培养原代神经干/祖细胞并扩增,进行形态学观察;联合使用多聚赖氨酸和层粘连蛋白促进细胞贴附,进行贴壁培养;免疫荧光法检测特异性标志蛋白Nestin表达和增殖指标Ki-67的表达;使用神经干/祖细胞分化培养基诱导分化培养7 d后,免疫荧光法检测GFAP、DCX、Tuj1和S100β的表达。结果与结论:（1）培养的神经干/祖细胞约82%表达Nestin,约49%表达Ki-67;（2）诱导分化后,少数细胞为DCX阳性,大多数细胞为GFAP阳性。荧光双色染色后显示Tuj1和S100β表达的神经元和星形胶质细胞比例为1∶1.7;（3）结果显示,从新生C57BL/6小鼠海马组织中成功分离并高效培养出神经干/祖细胞,贴壁培养后有效地对其增殖和分化能力进行了鉴定,能够为进一步实验研究提供足够的细胞来源。 

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【部分图文】：

神经干/祖细胞原代和传代培养Figure1Primaryandsubcultureofneuralstem/progenitorcells于100μm；G为传代培养第5天Accutase酶消化后第0天(×200)

图4分化培养7d后神经干/祖细胞分化能力鉴定Figure4Identificationofdifferentiationabilityofneuralstem/progenitorcellsafter7daysofdifferentiation红色为Tuj1染色阳性

【参考文献】：
期刊论文
[1]Brain injury and neural stem cells[J]. Parker E.Ludwig,Finosh G.Thankam,Arun A.Patil,Andrea J.Chamczuk,Devendra K.Agrawal.  Neural Regeneration Research. 2018(01)
[2]Roles of neural stem cells in the repair of peripheral nerve injury[J]. Chong Wang,Chang-feng Lu,Jiang Peng,Cheng-dong Hu,Yu Wang.  Neural Regeneration Research. 2017(12)



本文编号：3668698