单核苷酸错配对于Cpf1特异性的影响（英文）

发布时间：2022-08-02 15:05

　　CRISPR/Cas系统从发现和应用以来,热度持续上升。在过去几年中,这种技术已经成为了基因编辑的标准方案。该技术用一条指导RNA（guideRNA）来引导Cas9或Cpf1等核酸酶在特定的位点实现双链打断。但是这种系统也有可能在非特异性的位置进行切割,这种现象成为"脱靶效应"。脱靶剪切现象可能会给基因功能研究或者临床治疗带来很多麻烦。为了深入研究Cpf1的特异性,本研究通过一套双荧光报告系统探索了单核苷酸错配的影响。结果表明,间隔区内的poly（T）结构会阻止Cpf1的靶向切割。而且rA的错配似乎是CRISPR/Cpf1容忍度最低的一类,这与CRISPR/Cas9的情况相同。这种相似性可能来源于两种酶在进化上的同源性。上述结果表明,在使用CRISPR/Cp1或者CRISPR/Cas9的时候应当更多注意其脱靶效应,因为这种效应是这套系统的一个内在特性。 

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【文章目录】：
1. Introduction
2. Materials and methods
    2.1. Plasmids and primers
    2.2. Cleavage efficiency assay
3. Results
    3.1. The cleavage efficiency can be sensitively detected by the dual-luciferase assay
    3.2. Poly (T) existing in spacer may abolish the cleavage activity
    3.3. Targeting specificity of PAM sequence
    3.4. rA Mismatches tend to be the lowest tolerance in AAVS1
4. Discussion



本文编号：3668745