增强基因工程抗体表达策略的初步探讨

发布时间：2022-09-28 13:18

　　基因工程抗体具有广阔的应用前景，但其临床用药量相当大，如治疗B细胞淋巴瘤的抗CD20抗体（Rituxan），一个疗程用药量约为1.2 g；应用于乳腺癌的抗HER2抗体（Herceptin），一个疗程用药量约为0.88 g。而目前制约抗体大规模应用的最大障碍是抗体的产量。本课题旨在探索提高抗体基因表达的策略，主要工作及结果如下： 一、含突变neo基因的高效表达载体的构建及热点整合 1、通过PCR方法对新霉素磷酸转移酶（neo）基因进行点突变，构建成含Anti-Her2-scFv-Fc-IL-2融合蛋白和突变neo基因（mneo）双顺反子表达载体，实现了融合蛋白和neo基因在CHO细胞中的共表达。 2、含有mneo基因的转染细胞G418抗性显著降低，而融合蛋白表达水平明显高于含野生型neo细胞的高表达克隆，表达量约达3μg／ml，且细胞生长状态和目的蛋白表达水平均十分稳定，表明目的基因已经稳定地整合于宿主细胞染色体热点位置。此设计方案不仅大大提高了外源基因的表达量，且极大地降低了筛选阳性克隆的劳动强度。 ... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 弱化neo基因-热点整合:抗体融合蛋白强势表达克隆的高效筛选
    第一章 抗体融合蛋白-neo基因突变体双顺反子真核表达载体的构建
        材料
        方法
        结果
    第二章 稳定表达抗体融合蛋白克隆的高效筛选
        材料
        方法
        结果
        讨论
第二部分 鼠抗体基因转录调控序列数据库的建立
    第一章 鼠抗体基因调控区序列的分析
        材料与方法
        结果和讨论
    第二章 鼠抗体基因转录调控区序列数据库的建立
        材料与方法
        结果
        讨论
总结
参考文献
致谢
英文缩略语表
文献综述
附录
    1 、 硕士期间投出文章
    2 、 硕士期间获得的奖励
    3 、 申请专利



本文编号：3681733