合成PHA基因组克隆片段的序列分析及相关基因的分离

发布时间：2022-10-03 17:50

　　聚-β-羟基烷酸是微生物代谢过程中产生的贮存物质，是制造塑料的新型原料，可被微生物完全降解，利用植物生物反应器合成PHA是现在研究热点。本论文主要研究实验室拥有的从Pseudomanas菌中克隆的合成PHA的基因组片段，利用生物信息学方法分析其序列特征，从中找出与PHA合成相关的基因，并用PCR方法分离这些基因。结果显示： 1 使用核酸分析软件对合成PHA克隆片段的序列进行分析，找到了五个开放阅读框，其中ORF1、ORF2和ORF3在同源性搜索中与合成PHA相关基因的同源性很高，而ORF4、ORF5与PHA合成的基因几乎没有同源性。 2 对与ORF1、ORF2和ORF3高度同源性的蛋白序列进行序列比对分析，表明它们与合成PHA的相关基因编码的蛋白序列之间存在高度的保守性，它们的功能可能分别对应于PHA合酶（PhaC）、3-酮硫裂解酶（PhaA）和乙酰乙酰CoA还原酶（PhaB）。其中PHA合酶与其它Pseudomonas菌中的PHA合酶在蛋白质序列上存在较大的差异，可能是一种新的PHA合酶。 3 ... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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引言
    1 聚-β-羟基烷酸生物合成研究进展
    2 本实验研究内容、意义及技术路线
材料和方法
    1 试验材料
    2 仪器设备和试剂
    3 方法
结果与分析
    1 含PHA基因的基因组DNA片段的测序及序列分析
        1.1 测序
        1.2 测序的质量分析
        1.3 开放阅读框ORF抽提
            1.3.1 开放阅读框的抽提
            1.3.2 开放阅读框的蛋白质序列
        1.4 开放阅读框ORF的同源性及序列比对分析
            1.4.1 ORF1的同源性及序列比对分析
            1.4.2 ORF2的同源性及序列比对分析
            1.4.3 ORF3的同源性及序列比对分析
            1.4.4 ORF4的同源性分析
            1.4.5 ORF5的同源性分析
        1.5 转录启动子区的预测
    2 phaA、phaB和phaC基因的分离
        2.1 phaA、phaB和phaC的PCR扩增
            2.1.1 Pseudomanas sp．基因组DNA的提取
            2.1.2 phaA的引物设计及PCR扩增
            2.1.3 phaB的引物设计及PCR扩增
            2.1.4 phaC的引物设计及PCR扩增反应
        2.2 phaA、phaB和phaC的纯化及其与pGEM-T载体的连接
            2.2.1 扩增片段纯化
            2.2.2 PCR扩增片段与pGEM-T载体连接
            2.2.3 改良法提取质粒DNA
            2.2.4 重组子外源片段的酶切验证
    3 植物种子特异性表达载体pBI121-7S构建
        3.1 7S片段与无启动子的pBI121片段的分离纯化
        3.2 7S片段与无启动子的pBI121片段连接、转化与酶切筛选
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
附录


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3684541