荧光素酶报告系统检测大肠杆菌代谢产物调控STC-1细胞表达胆囊收缩素研究

发布时间：2022-10-04 12:38

　　[目的]本文旨在筛选出可调控肠道Ⅰ细胞表达胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）的大肠杆菌代谢物,建立可方便检测CCK表达的STC-1细胞模型。[方法]利用分子克隆技术构建含有CCK启动子调控荧光素酶的慢病毒载体,包装慢病毒并感染STC-1细胞,获得STC-1/CCK-Luc细胞系。用大肠杆菌基因敲除株培养液上清处理上述细胞,检测荧光素酶活性,确定可影响CCK表达的大肠杆菌基因及代谢产物。使用纯化的代谢产物处理STC-1细胞及肠道类器官,通过Western blot及免疫荧光法检测CCK表达水平的变化。[结果]酶切鉴定及DNA测序表明慢病毒载体构建成功,荧光素酶活性检测发现大肠杆菌ΔSapD株菌液上清可显著抑制荧光素酶的表达。敲除SapD基因可以使培养液中腐胺水平下降,而腐胺可以上调STC-1细胞及肠道类器官中CCK的表达。[结论]成功构建了能够体外检测CCK表达的细胞系,筛选出1个能够调控CCK表达的大肠杆菌突变体。 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 慢病毒载体构建及细胞系建立
        1.2.1 慢病毒载体构建与鉴定
        1.2.2 慢病毒包装及感染目的细胞
        1.2.3 Peptone-A验证STC-1/CCK-Luc活性
    1.3 大肠杆菌敲除株(ΔSapD)菌液上清对CCK表达的影响
        1.3.1 大肠杆菌ΔSapD株的鉴定
        1.3.2 大肠杆菌ΔSapD株菌液上清对CCK表达的影响
    1.4 腐胺影响CCK表达的机制研究
        1.4.1 腐胺处理STC-1细胞后CCK表达水平的检测
        1.4.2 腐胺处理肠道类器官后CCK表达水平的检测
    1.5 统计学方法
2 结果与分析
    2.1 慢病毒载体的构建及鉴定
    2.2 重组慢病毒包装及稳定感染细胞系的建立
    2.3 大肠杆菌敲除株ΔSapD的鉴定及其代谢产物对CCK表达的影响
    2.4 腐胺对CCK表达的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]肠道菌群失调诱导肥胖发生发展的机制研究进展[J]. 许文琦,王生,王艳,梅其炳,刘莉.  世界临床药物. 2018(06)
[2]肠类器官的研究与应用[J]. 高云,赵九龙,高俊,邹多武,陈若华.  国际消化病杂志. 2017(02)



本文编号：3685043