抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬的影响及机制

发布时间：2022-10-29 09:45

　　目的探讨抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬中的影响。方法分离培养纯种新西兰兔腹腔原代巨噬细胞并分为4组,加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002（10μmol/L）组、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂雷帕霉素（10 nmol/L）组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂曲西立滨组（20μmol/L）以及空白对照组。共培养4 h、12 h后分别收集细胞,运用透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,细胞免疫荧光法检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）分子的表达,Western blot检测Akt、mTOR、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（pmTOR）及自噬相关蛋白Beclin-1和自噬蛋白Atg5-Atg12连接体的表达,单丹酰尸胺（MDC）染色法观察自噬溶酶体的变化。结果与空白对照组相比,透射电镜下LY294002组自噬体、自噬空泡、髓磷脂图像等自噬标记物明显减少,雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多;激光共聚焦显微镜下LY294002组LC3Ⅱ表达显著减少,雷帕霉素组、曲西立滨组表达显著增多;Western blot结果显示LY294002组Bec... 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1. 1 实验动物
    1. 2 试剂和药品
    1. 3 仪器
    1. 4 家兔原代巨噬细胞培养及分组
    1. 5 透射电镜观察超微结构
    1. 6 细胞免疫荧光标记
    1. 7 单丹磺酰尸胺( MDC) 染色
    1. 8 Western blot检测细胞中m TOR、p-m TOR、Akt、p-Akt、Beclin-1 及Atg5-Atg12 蛋白的表达
    1. 9 统计学处理
2 结果
    2. 1 透射电镜观察细胞自噬体
    2. 2 细胞免疫荧光标记情况
    2. 3 自噬溶酶体的表达
    2. 4 蛋白表达情况
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]自体吞噬在动脉粥样硬化斑块中的作用[J]. 翟纯刚,季晓平,陈文强.  国际心血管病杂志. 2013(03)
[2]PI3K/Akt/mTOR信号通路在巨噬细胞自噬及动脉粥样硬化斑块不稳定中的作用[J]. 王和峰,翟纯刚,庞文会,王晨,杨敏,赵凯,李大庆,张运,李继福,陈文强.  中国病理生理杂志. 2013(03)
[3]口服雷帕霉素抑制支架内再狭窄的血管内超声的实验研究[J]. 邵娜,陈文强,李大庆,由倍安,安贵鹏,齐天军,徐福彪,胡晓波,杜金玲,杨敏,王晨,张运,陈玉国,李继福.  山东大学学报(医学版). 2011(06)



本文编号：3697455