抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2022-10-29 11:23

　　目的制备抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体,并进行鉴定。方法用重组蛋白p GEX-MIC6作为抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,对融合后的杂交瘤细胞进行筛选后,经腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水,鉴定单抗的亚类。采用辛酸-硫酸铵法结合蛋白亲和层析柱纯化腹水,SDS-PAGE分析抗体的相对分子质量,间接ELISA法检测抗体效价及特异性,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定抗体浓度。结果最终获得两株能稳定分泌新孢子虫MIC6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A1和1H11,分泌的抗体分别属于Ig G1和Ig G2b亚类。纯化后的腹水经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约为50 000的重链和25 000的轻链条带,纯化效果较好;1A1和1H11的腹水效价分别为5.12×104和1.024×105,浓度分别为0.935和2.010 mg/ml,两株单抗均能特异性识别新孢子虫,与弓形虫无交叉反应。结论制备的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体特异性较强,为进一步研究新孢子虫MIC6的生物学功能及建立特异敏感的新孢子虫检测方法奠定了基础。 

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 虫株、细胞及重组蛋白
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂
    1.4 动物免疫及血清抗体效价的检测
    1.5 杂交瘤细胞的制备
        1.5.1 饲养层细胞的准备
        1.5.2 细胞融合
    1.6 杂交瘤细胞的筛选及亚克隆
    1.7 腹水的制备
    1.8 单抗亚类的鉴定
    1.9 单抗的纯化
        1.9.1 辛酸-饱和硫酸铵法
        1.9.2 亲和层析法
        1.9.3 纯化后腹水的SDS-PAGE分析
    1.1 0 纯化单抗的鉴定
        1.1 0. 1 效价的测定
        1.1 0. 2 浓度的测定
        1.1 0. 3 特异性的检测
2 结果
    2.1 杂交瘤细胞株的筛选
    2.2 单抗的亚类
    2.3 纯化后腹水的SDS-PAGE分析
    2.4 纯化单抗的鉴定
        2.4.1 效价
        2.4.2 浓度
        2.4.3 特异性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国北方六省市牛新孢子虫病血清学调查[J]. 邹世颖,何倩妮,王小蕾,蒋楠,杨宏军,陈荣贵,王岩,吴清民,吕艳丽.  中国兽医杂志. 2012(02)
[2]顶复门原虫入侵相关因子的研究进展[J]. 戚南山,孙铭飞,廖申权,吴彩艳,吕敏娜,袁建丰,余劲术,李祥瑞,蔡建平.  畜牧兽医学报. 2012(02)
[3]β-酪蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 宋芳,周玉,卢士英,任洪林,李岩松,柳增善,刘文迪,郝亚明.  中国实验诊断学. 2011(08)
[4]弓形虫微线体蛋白的研究进展[J]. 郑斌,詹希美.  国外医学(寄生虫病分册). 2005(05)



本文编号：3697598