人抗HBsAg单链抗体基因的构建、表达及其表达产物的活性鉴定

发布时间：2022-12-07 23:24

　　目的 构建人抗HBsAg单链抗体基因，在真核细胞和原核细胞中进行表达，并对其表达产物的活性进行鉴定。 方法 以从噬菌体抗体库中筛选获得的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板，分别扩增出其轻、重链可变区（V_L、V_H）基因，通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽（Gly₄Ser）₃的编码序列连接，并引入前导肽编码序列，构建具有L-V_H-Linker-V_L结构的单链抗体基因。 将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-N3，瞬时转染COS-7细胞，分析其表达情况。稳定转染Jurkat细胞，建立稳定表达ScFv融合蛋白的细胞系，并分析其表达产物的活性。 将获得的不含前导肽的单链抗体基因克隆入HA和6His融合的原核表达载体pTAT-HA，在大肠杆菌BL21中进行表达，分析其表达情况。表达产物 并经NiNTA柱... 

【文章页数】：105 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英文缩略语表
中文摘要
英文摘要
文献回顾
    一、 单链抗体在基因治疗中的研究进展
    二、 乙型肝炎的基因治疗策略
前言
实验材料
研究内容及结果
    一、 人抗HBsAg单链抗体基因的构建
        1 实验方法
        2 实验结果
        3 讨论
    二、 人抗HBsAg单链抗体基因在真核细胞中的表达及分析
        1 实验方法
        2 实验结果
        3 讨论
    三、 人抗HBsAg单链抗体基因在原核细胞中的表达及分析
        1 实验方法
        2 实验结果
        3 讨论
小结
致谢
参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型肝炎DNA疫苗诱导小鼠免疫反应的实验研究[J]. 王斌,周霞秋,诸江,谢青,臧国庆,俞红,郭清.  中华肝脏病杂志. 2001(02)
[2]新的人抗HBsAg抗体Fab cDNA的克隆及序列分析[J]. 廖琪桦,高辉,陈南春,杨安钢,陈苏民,粟宽源,余宙耀.  第四军医大学学报. 2001(02)
[3]乙型肝炎病毒C区反义RNA靶向肝细胞抗病毒的研究[J]. 张建军,陈枫,钟森,唐坤华,史小玲,王明勇,彭建一.  中华肝脏病杂志. 2000(03)



本文编号：3713070