SMB-S15细胞中朊病毒PMCA方法的建立及对白藜芦醇抗朊病毒作用的评价

发布时间：2022-12-23 06:23

　　朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增（Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA）是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞中朊病毒的PMCA体系,并探索PMCA技术在评价白藜芦醇抗朊病毒作用的意义,本研究以朊病毒感染细胞系SMB-S15细胞匀浆为种子,健康小鼠脑组织匀浆为底物,建立PMCA技术平台。将不同浓度的白藜芦醇导入PMCA体系,通过Western Blot方法检测PMCA产物中异常朊蛋白（PrPSc）的生成和变化。结果显示:SMB-S15细胞中PrPSc可以在建立的PMCA体系有效地复制。新生成的PrPSc分子的糖基化特征与原始细胞中的PrPSc不同,其双糖基化分子比例明显增加。同时也有别于羊瘙痒因子139A和ME7感染小鼠脑组织中的PrPSc分子。加入白藜芦醇后,PrPSc在PMCA体系中的复制明显被抑制,呈现出剂量依赖效应,其EC50约为4.616μM。这些结果表明:SMB-S15细胞中的PrPSc可以通过PMCA大量扩增,建立... 

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【文章目录】：
材料与方法
    1材料
    2底物及种子的制备
    3 PMCA
    4蛋白酶K消化
    5免疫印迹法
结果
    1细胞朊病毒PMCA的建立
    2白藜芦醇对细胞朊病毒在PMCA体系中复制的影响
讨论



本文编号：3724894