HIV-1 gp41第二优势表位簇在大肠杆菌中的高效表达

发布时间：2023-02-22 18:16

　　目的 提供高质量的重组膜抗原是提高HIV ELISA检测试剂质量、提高gp41抗体检测特异性和灵敏性的的最重要的环节。本课题构建了HIV-1 SF2株跨膜蛋白gp41第二优势表位簇基因的原核高效表达克隆，初步检验该融合蛋白抗原性，探讨将其作为侯选多肽用于制备诊断试剂、检测HIV-1抗体的可能性；并探讨提高原核表达的途径。 方法利用密码子的兼并性，在保证目的基因编码氨基酸不变和不改变引物特异性的前提下，在PCR上游引物引入突变碱基。然后，通过聚合酶链式反应扩增HIV-1SF2毒株跨膜蛋白gp41基因片段(nt 9153-9233)。该基因编码相当于即160的第649-675位氨基酸残基，即gp41的第二优势表位簇。PCR产物和融合蛋白表达载体pGEX-4T-2经EcoRI和SalI双酶切后连接，得到重组质粒pGEX-4T-2／SE，并转化表达宿主菌DH5α。获得含重组质粒的宿主菌，经IPTG诱导，高效表达出HIV-1第二优势表位簇融合蛋白，产物经SDS-PAGE，使用凝胶成像系统扫描目的融合蛋白的含量百分比，并进行Western-Blot检测其与HIV-1阳性血清及正常人血清的...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 方法
3 结果
    3.1 目的基因的扩增
    3.2 原核重组表达质粒的鉴定
    3.3 表达蛋白的检测
    3.4 重组蛋白的抗原性分析
4 讨论
5 小结
附录
参考文献
致谢
文献综述
    参考文献



本文编号：3748053