人胰岛素样生长因子1基因的克

发布时间：2023-03-05 00:32

　　胰岛素样生长因子1(IGF-1)是一种多功能细胞调控因子，大量 实验表明，IGF-1生物学作用广泛，对多种组织器官有生物学作用。目 前，人IGF-1(hIGF-1)制剂在临床上已用于治疗糖尿病、胰岛素抵抗 综合症、侏儒症及神经系统疾病等多种顽疾，取得较好的临床效果，显 示出良好的应用前景。 为获得大量纯度高的、具有生物学活性的hIGF-1以满足基础研究 与临床应用的需要，本文应用基因工程方法，将hIGF-1基因与原核表 达载体pRSET B进行重组，在大肠杆菌中进行了表达，并对其分离纯 化及性质检定方法进行了探讨。 首先，根据已知天然hIGF-1编码基因序列，在不改变氨基酸序列 的条件下，人工设计合成了适合于在大肠杆菌中表达的hIGF-1基因并 克隆于pUC19中，构建了pUCIGF克隆载体。设计引物，导入合适的 酶切位点，以pUCIGF为模板，PCR扩增目的基因，经适当酶切后，克 隆于原核表达载体pRSET B中，构建了pRSET-IGF表达重组质粒，经 PCR筛选、酶切鉴定和核苷酸序列测定，确定重组质粒pRSET-IGF构 建完全正确。将重组质粒pRSET-IGF转...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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中英文缩略语
前言
试剂与材料、主要仪器
实验方法
    一、 hIGF-1基因的设计与合成
    二、 引物的设计与合成
    三、 表达载体的选择
    四、 PCR扩增目的基因
    五、 hIGF-1基因的克隆
    六、 重组质粒的筛选与鉴定
    七、 目的基因的表达
    八、 表达产物的纯化
    九、 hIGF-1的性质检定
实验结果
    一、 hIGF-1基因的设计与合成
    二、 hIGF-1基因的扩增
    三、 重组质粒的构建与鉴定
    四、 重组质粒在大肠杆菌中的表达
    五、 hIGF-1蛋白的纯化
    六、 表达产物的性质检定
讨论
    一、 hIGF-1基因克隆的策略
    二、 目的基因的表达
    三、 重组蛋白的纯化
    四、 重组蛋白的生物学活性鉴定
结论
参考文献
综述
致谢



本文编号：3755325