突变人CD59基因在真核细胞中的表达活性研究

发布时间：2023-03-11 17:52

　　目的 构建突变人CD59的真核表达系统，获得高效表达突变人CD59的CHO细胞株，并进行糖化和非糖化突变人CD59蛋白功能的检测，探讨CD59作为补体攻膜复合体抑制物在糖尿病血管并发症病理机制中的重要作用，为人类糖尿病血管增殖症的发病机理提供依据。 方法 突变人CD59的真核细胞表达系统的建立：将含有突变人CD59的重组PALTER-MAX质粒与PcDNA运用阳离子脂质体介导法共转染入CHO细胞；用新霉素类似物(G418)筛选出阳性克隆，并用流式细胞术进一步筛选出高效表达克隆，建立稳定高效表达CHO细胞株。应用免疫组化方法、免疫荧光技术进一步鉴定稳定高效表达CHO细胞株；裂解细胞，应用SDS—PAGE凝胶电泳技术、免疫印迹技术、固相酶联免疫吸附试验验证稳定高效表达阳性细胞CD59的表达；高糖培养稳定高效表达阳性细胞，并运用BCECF染料释放试验研究糖化和非糖化突变人CD59的抗补体活性。 结果 成功构建突变人CD59的真核细胞表达系统：运用阳离子脂质体介导法将含有突变人CD59的PALTER—MAX重组质粒与PCDNA共转染入CHO细胞：用含有400ug／mlG4...

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【学位级别】：硕士

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引言
材料
方法
结果
讨论
小结
附录
参考文献
致谢
文献综述
    参考文献



本文编号：3759973